“黑胶虫”清除基础培养基(RPMI-1640)的使用方法

背景及概述^[1]

“黑胶虫”及其分解复合物是一种常见的细胞污染物，与细胞共生，随细胞传代而传代，通常抗生素对其无效。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡。目前很多细胞存在被“黑胶虫”污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成了极大地影响。“黑胶虫”污染的细胞常见的特征有以下几点：（1）培养液不浑浊，但在显微镜下观察细胞时，细胞周围和培养液中有很多“小黑点”，且随着细培养时间的延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除；（2）“小黑点”污染的细胞，营养消耗快，需要频繁更换培养液；（3）“黑胶虫”污染的细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能导致细胞形态的改变。“黑胶虫”清除基础培养基(RPMI-1640)含有清除“黑胶虫”的特殊成分，对清除“黑胶虫”污染效果显著，能够很好的杀灭和抑制“黑胶虫”。

使用方法^[1]

1、根据所培养细胞的特性，将“黑胶虫”清除基础培养基(RPMI-1640)配制成相应的完全培养基。

2、将50～100万个细胞铺到60mm的细胞培养皿内，加入4ml“黑胶虫”清除基础培养基(RPMI-1640)孵育细胞，（也可以与细胞正常培养方法相同，直接将“黑胶虫”清除完全培养加入到培养器皿中孵育细胞）。

3、次日更换新鲜的“黑胶虫”清除完全培养基，并更换新的培养器皿；之后每2～3天更换1次培养液，换液时用无菌的平衡盐溶液洗涤细胞1～2次；期间如果细胞密度过大，请保持细胞密度适当（贴壁细胞可能需要用胰酶消化）。

4、使用“黑胶虫”清除培养基3天之后即可见清除效果，连续使用12～14天即可将“黑胶虫”清除，若“黑胶虫”污染较为严重，可延长处理3～5天。

5、因环境中可能依然存在污染源，为避免细胞再次受到“黑胶虫”的污染，建议您在“黑胶虫”清除以后继续使用“黑胶虫”清除培养基，以达到预防的效果。

参考文献

[1]“黑胶虫”清除基础培养基(RPMI-1640)使用说明