“黑胶虫”清除基础培养基(RPMI-1640)的配制方法

概述^[1][2]

RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写，代指洛斯维·帕克纪念研究所。 RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。RPMI-1640基础培养基最初是为淋巴细胞培养专门设计的，现在已广泛应用于各种正常细胞核癌细胞的培养，尤其是悬浮细胞的培养，是使用最为广泛的培养基之一。其含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分，但不含蛋白质、脂类或者任何生长因子需搭配血清和无血清添加物使用。

“黑胶虫”清除基础培养基(RPMI-1640)成分说明

配制方法

干粉培养基的过滤配制

1 将 1 升量的干粉在 950ml 细胞培养级纯净水中完全溶解

2 加入 2 克碳酸氢钠，继续搅拌至完全溶解

3 用 1N 盐酸或 1N 氢氧化钠调整到要求的 pH，并将溶液体积调至1000ml

4 在超净台内用 0.22um 滤膜负压过滤

5 将培养基在 2~8℃避光保存

高压灭菌型的配制

1 将 1 升的高压灭菌型干粉在 900ml 细胞培养级纯净水中完全溶解

2 将溶液 pH 调至 4.0 并将溶液体积调至 960ml

3 在 121℃，15psi 高压消毒 5 分钟

4 将培养基迅速取出，避免过久加热引起成份分解或液体蒸发减少

5 待培养基冷却至室温后，无菌操作加入 29.3ml 的无菌 7.5%碳酸

氢钠溶液，及 10ml 的无菌 200mM L-谷氨酰胺

6 如有必要，用无菌的 1N 盐酸或 1N 氢氧化钠调整 pH

7 将培养基在 2~8℃避光保存

质检指标

形状：淡黄色均匀粉末（干粉），澄清透明（液体）  

溶解：干粉按要求溶解后澄清透明  

pH 值：（加碳酸氢钠前）4.4-5.0（加碳酸氢钠后）(液体）7.4-8.0  

渗透压：（加碳酸氢钠前）230-270（加碳酸氢钠后）280-320 (液体）  

菌落：每克小于 100cfu (干粉），无菌（液体）  

细胞生长：正常（干粉及液体）

主要参考文献

[1] Martha M.MooreBarry E.Howard. Quantitation of small colony trifluorothymidine-resistant mutants of L5178Y/TK+/− mouse lymphoma cells in RPMI-1640 medium. Mutation Research Letters.Volume 104, Issues 4–5, May–June 1982, Pages 287-294

[2] D Peptanariu , Mihaela Zlei , Anca Negură . Optimization of culture conditions for bone marrow stromal cells in RPMI-1640 medium.《Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi》  2012