人维甲酸诱导基因1蛋白(RIG1)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人维甲酸诱导基因1蛋白(RIG1)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人维甲酸诱导基因1蛋白(RIG1)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人维甲酸诱导基因1蛋白(RIG1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

RIG-I，即视黄酸（维甲酸）诱导基因蛋白I（RIG-I），是细胞内识别病毒异常mRNA（通常是含有5'三磷酸盐的单链RNA和较短的双链RNA）的一种受体，是DexD/H盒的RNA解旋酶家族的成员。RIG-I的C端是解旋域，可以结合人工合成的双链RNA和病毒双链RNA，并以ATP酶依赖的方式解开双链RNA；N端是2个串联的半胱天冬酶募集结构域（CARD）。

在结构上，RIG-I主要包括N端两个重复的caspase活化和募集结构域（caspase activation and recruitment domain,CARD），位于中间的解螺旋酶结构和C端RNA结构域。RIG-I的N端CARD结构域即使在没有病毒感染的条件下，过表达结构域也能够促进细胞分泌I型干扰素（IFN）。因此，该结构域主要负责向下游传递信号。RIG-I的中间部分主要包含解螺旋酶结构域I-VI，该结构域为DExD/H家族保守结构域，其中解螺旋酶结构域I主要是Walker氏ATP结合结构域，该结构域对于RIG-I发挥正常功能非常重要，其突变会导致RIG-I信号转导的阻滞。RIG-I的C端包含大约170个氨基酸残基的RNA结合结构域，由于过表达该结构域会抑制病毒引起的干扰素基因的活化，因此，该结构域通常被认为是一个发挥抑制功能的结构域，在没有活化信号存在的时候，该结构域与CARD结构域相互作用，抑制RIG-I的活化。

应用^[4][5]

用于维甲酸诱导基因Ⅰ在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及其免疫学机制研究

随着天然免疫产生机制的认识，模式识别受体（Patternrecognition receptors,PRRs）对病原体相关分子模式（pathogen associated molecularpattern,PAMP）识别机制也适用于对损伤相关的分子模式（DMAP:damge associatedmolecule pattern）的识别,从而认识到在肝脏IR过程中，缺血缺氧所致的直接损伤使受损细胞释放内源性配体或危险信号（HMGB-1、HSP、尿酸、纤维蛋白原等），激活肝细胞或非实质细胞表面的模式识别受体，从而启动天然免疫反应，介导进一步的损伤。由此可见，模式识别受体及其信号通路在肝脏IR的过程中发挥着关键的作用。

然而，前期研究均集中在Toll样受体（Toll like receptors,TLRs）和相关的信号通路，而另一种重要的模式识别受体：RLRs（Retinoic-acid-inducible geneⅠ（RIG-Ⅰ）-likereceptors,RLRs）是否在肝脏IR损伤过程中也发挥作用并未受到关注。研究表明，RLRs所介导的抗病毒反应在机体抵抗病毒感染的天然免疫过程中发挥了关键的作用，其中又以维甲酸诱导基因Ⅰ（Retinoic-acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ）为最具代表性的分子，其是否在肝脏IR损伤过程中发挥作用以及如何发挥作用的机制值得探究。

RIG-Ⅰ又称DDX58A，包含925个氨基酸残基，属于DExD/H家族，主要分布在胞质中。RIG-Ⅰ主要识别并直接结合5’端磷酸化的病毒RNA，与其受体MAVS（mitochondrial antiviral signaling protein）、IPS-1（IFN-βpromoter stimulator1）或Cardif（CARD adaptor inducing IFN-β）结合，通过活化NF-κB和IRF3/7，引起I型干扰素分泌上调，介导抗病毒免疫应答。然而，机体自身表达的RNA最初也有5’端的磷酸化修饰，尽管在正常情况下机体自身来源的RNA均不会在胞浆中激活RIG-Ⅰ信号。

参考文献

[1]Oxidative stress:the mitochondria-dependent and mitochondria-independent pathways of apoptosis[J].Krishnendu Sinha,Joydeep Das,Pabitra Bikash Pal,Parames C.Sil.Archives of Toxicology.2013(7)

[2]Allogeneic bone marrow-derived mesenchymal stem cells attenuate hepaticischemia-reperfusion injury by suppressing oxidative stress and inhibiting apoptosisin rats[J].Guangxin Jin,Gongcai Qiu,Dequan Wu,Yanhua Hu,Pengfei Qiao,Chengjuan Fan,Feng Gao.International Journal of Molecular Medicine.2013(6)

[3]Mitochondrial localization of the antiviral signaling adaptor IPS‐1 is important for its induction of caspase activation[J].Tomohiko Okazaki,Maiko Higuchi,Yukiko Gotoh.Genes Cells.2013(6)

[4]Mechanistic overview of reactive species-induced degradation of the endothelial glycocalyx during hepatic ischemia/reperfusion injury[J].Free Radical Biology and Medicine.2012

[5]洪善娟.维甲酸诱导基因Ⅰ在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及其免疫学机制[D].第二军医大学,2013.