RAT ANTI C-MYC的应用

背景^[1-3]

RAT ANTI C-MYC是一类可以特异性结合ANTI-C-MYC的抗大鼠多克隆抗体，主要用于检测大鼠模型ANTI-C-MYC的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中ANTI-C-MYC水平。用纯化的ANTI-C-MYC抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ANTI-C-MYC，再与HRP标记的ANTI-C-MYC抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ANTI-C-MYC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中ANTI-C-MYC浓度。

c-myc基因是myc基因家族的重要成员之一，c-myc基因既是一种可易位基因，又是一种多种物质调节的可调节基因，也是一种可使细胞无限增殖，获永生化功能，促进细胞分裂的基因，myc基因参于细胞凋零，c-myc基因与多种肿瘤发生发展有关。

C-myc基因的产物为62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc，是由C-myc基因的外显子2和3共同编码的由439个氨基酸组成的蛋白质，定位细胞核内，为核蛋白，依C-one编码产物，功能分类，C-myc癌基因属核蛋白基因，具有转化细胞的能力，并具有与染色体、DNA结合的特性，在调节细胞生长、分化及恶性转化中发挥作用。

C-Myc蛋白在结构上可分为转录激活区，非特异DNA结合区，核靶序列，碱性区，螺旋一环一螺旋(HLH)及亮氨酸拉链区，在已知的转录因子中可介导蛋白的寡聚化，这两个区同时存在是C-myc蛋白所特有的，在其它蛋白质中，很少发现。在C-Myc蛋白中，螺旋一环一螺旋紧随着碱性区，揭示其以特异性序列方式和DNA相互作用

应用^[4][5]

用于基于c-Myc/CLIC4通路探究脂多糖致大鼠海马损伤的致病机制研究

通过建立内毒素血症模型,从组织水平、细胞水平及分子水平三个层次探究LPS致海马损伤的发生发展机制。

应用CRISPR/Cas9基因编辑技术对PC12细胞进行基因编辑,从而验证c-Myc/CLIC4通路在LPS诱导PC12细胞凋亡中的作用机制。为LPS致海马损伤的发病机制提供新思路,并为今后临床开展内毒素血症致海马损伤的治疗及进行相关的机制研究提供理论依据及试验基础。

在体试验选取36只健康雄性SD大鼠,随机均分为CON组和LPS组。LPS组腹腔注射1 mL/kg LPS(10 mg/mL),CON组腹腔注射1 mL/kg生理盐水。造模4 h后经心脏采血并处死大鼠,开颅,分离大脑皮层后取海马备用。

通过检测大鼠血清中相关炎症指标,观察海马组织病理学变化,观察海马超微组织结构变化,检测线粒体途径凋亡相关蛋白表达量,以及检测c-Myc/CLIC4通路的mRNA水平及蛋白表达量,阐明线粒体凋亡途径在LPS致海马损伤中的致病机制,并探究c-Myc/CLIC4通路是否参与对线粒体凋亡途径的调控。

体外试验中,选用PC12细胞,分成5组,分别为CON组,LPS组,sgc-Myc组,sgCLIC4组,sgCON组。sgc-Myc组,sgCLIC4组细胞分别用CRISPR/Cas9基因编辑技术编辑c-Myc基因、CLIC4基因。

并做如下处理:CON组更换新完全培养基;其他各组更换含200μg/mL LPS的完全培养基。应用流式细胞术,Annexin V-FITC及Western blot等方法检测敲除c-Myc及CLIC4基因后细胞凋亡水平的变化,从而证实c-Myc/CLIC4通路对线粒体凋亡途径的调控作用。

参考文献

[1]Endocannabinoid-mediated modulation of Gq protein-coupled receptor mediates vascular hyporeactivity to nor-adrenaline during polymicrobial sepsis[J].Preeti Singh,Pranshu Sharma,Udayraj P.Nakade,Abhishek Sharma,Manju Gari,Soumen Choudhury,Amit Shukla,Satish Kumar Garg.Pharmacological Reports.2018

[2]Mitochondrial dynamics and protective effects of a mitochondrial division inhibitor,Mdivi-1,in lipopolysaccharide-induced brain damage[J].Songyun Deng,Yuhang Ai,Hua Gong,Qing Feng,Xiao Li,Caixia Chen,Zhiyong Liu,Yimin Wang,Qianyi Peng,Lina Zhang.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2018(3)

[3]Non-bilayer structures in mitochondrial membranes regulate ATP synthase activity[J].Sardar E.Gasanov,Aleksandr A.Kim,Lev S.Yaguzhinsky,Ruben K.Dagda.BBA-Biomembranes.2018(2)

[4]The Role of Interleukin-6 in Castleman Disease[J].Kazuyuki Yoshizaki,Shinichi Murayama,Hiroki Ito,Tomohiro Koga.Hematology/Oncology Clinics of North America.2018(1)

[5]李蓓.基于c-Myc/CLIC4通路探究脂多糖致大鼠海马损伤的致病机制[D].东北农业大学,2019.