大肠艾希氏菌H7诊断血清的主要应用

背景^[1-3]

大肠艾希氏菌H7诊断血清是用于大肠艾希氏菌H7鉴定实验的血清学诊断血清。细菌血清学反应是指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原抗体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。肠杆菌科是由多个菌属组成，生物学性状相似，均为革兰氏阴性杆菌，这些细菌常寄居在人和动物的消化道，并随粪便排出体外，广泛分布在水和土壤中，大多数肠道杆菌属于正常菌群。当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时，成为条件致病菌而引起疾病。部分肠道杆菌是致病菌。例如：产毒大肠埃希氏菌、伤寒沙门氏菌、各种志贺氏菌可使人患肠道传染病。

EHEC除其代表菌株O157:H7外，还包括O157:NM、O26:H11、O111:H8、O125:NM、O121:H19、O45:H2、O4:NM、O145:NM、O5:NM、O91:H21、O103:H2、O113:H2等血清型的部分菌株。血清学鉴定包括O抗原和H抗原的鉴定。前者可使用玻片凝集试验或胶乳凝集试验；后者则应先进行动力试验，动力活泼者再进行玻片和试管凝集试验。EHECO157:H7的另一个显著特征是可产生大量的Vero毒素（VT），也称作类志贺氏毒素（SLT），是EHEC的主要致病因子。Vero毒素按免疫原性等方面的不同可分为VT1和VT2。该毒素有一个A亚单位和5~6个B亚单位组成。B亚单位与宿主肠壁细胞糖脂受体结合，具有毒素活性的A亚单位进入细胞，改变60s核糖体的组分，干扰蛋白质的合成。编码VT的基因位于噬菌体上，可缺失而不产生VT。

应用^[4][5]

大肠艾希氏菌H7诊断血清用于牛源性致病性大肠杆菌的分离鉴定及E.coli O157:H7生物学特性研究。

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，俗称大肠杆菌，埃希氏菌属，属于肠杆菌科（Enterobacterriaceae)。绝大多数是温血动物肠道中占优势的兼性厌氧寄居菌群，在正常情况下对动物机体不具有致病能力。但后来研究发现，不同的血清型对机体的致病能力有所不同，O157:H7血清型是大肠杆菌的主要血清型，是与人类的出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征相关，E.coli O157:H7是牛、羊等反刍动物无症状携带的，由于O157:H7的感染剂量低、致病性强和严重的临床症状，使其感染已成为一个全球性广泛关注的公共卫生问题。E.coliO157:H7的半数致死量（LD50）为7.9×10~7CFU，最小致死量（MLD）为5.0×10~6CFU；采用PCR法对E.coli O157:H7分离菌株进行毒力基因的检测，检测到有eaeA、stx1和hly基因的存在。安徽牛场（A1菌株）和山东牛场（S1菌株）分离出的病原菌经PCR鉴定均为大肠埃希氏菌，A1菌株的生化结果显示：对葡萄糖、乳糖、木糖、甘露糖、麦芽糖、蕈糖、果糖、硝酸盐、山梨醇、卫矛醇和靛基质为阳性；棉子糖、VP、蔗糖、H2S和枸橼酸盐为阴性。药敏试验结果显示：对头孢他啶、丁胺卡那霉素、妥布霉素、头孢哌酮以及呋喃妥因有较高的敏感性；但是对红霉素、头孢噻腭以及氧氟沙星、利福平有轻微的耐药性；对环丙沙星、氯霉素以及四环素等抗生素有较强的耐药性。致病性实验结果表明有一定的致病性；S1菌株的生化结果显示：对葡萄糖、乳糖、木糖、甘露糖、麦芽糖、蕈糖、果糖、硝酸盐、山梨醇、蔗糖、卫矛醇和靛基质为阳性；棉子糖、VP、H2S和枸橼酸盐为阴性；药敏试验结果显示：对氯霉素、链霉素、诺氟沙星以及红霉素等抗生素有很强的耐药性；对头孢哌酮、丁胺卡那霉素有较强的敏感性；对头孢他啶、妥布霉素的耐药程度较低；对呋喃妥因没有表现出明显的敏感性，处于中介；致病性实验结果表明有一定的致病性。

参考文献

[1]A multiplex PCR procedure for the detection of six major virulence genes in Escherichia coli O157:H7[J].Jianfa Bai,Xiaorong Shi,T.G.Nagaraja.Journal of Microbiological Methods.2010(1)

[2]Characterisation of Escherichia coli O157 strains from humans,cattle and pigs in the North-West Province,South Africa[J].Collins Njie Ateba,Cornelius Carlos Bezuidenhout.International Journal of Food Microbiology.2008(2)

[3]StcE,a metalloprotease secreted by Escherichia coli O157:H7,specifically cleaves C1 esterase inhibitor[J].Wyndham W.Lathem,Thomas E.Grys,Sarah E.Witowski,Alfredo G.Torres,James B.Kaper,Phillip I.Tarr,Rodney A.Welch.Molecular Microbiology.2002(2)

[4]PATHOGENICITY ISLANDS AND THE EVOLUTION OF MICROBES[J].Jorg Hacker,James B.Kaper.Annual Review of Microbiology.2000

[5]赵明礼.牛源性致病性大肠杆菌的分离鉴定及E.coli O157:H7生物学特性研究[D].东北农业大学,2013.