人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒的应用

背景[1-3]

人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中p-PKC水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入p-PKC、生物素化的抗人p-PKC抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的p-PKC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

蛋白激酶C是G蛋白偶联受体系统中的效应物,在非活性状态下是水溶性的，游离存在于胞质溶胶中，激活后成为膜结合的酶。蛋白激酶C的激活是脂依赖性的，需要膜脂DAG的存在，同时又是Ca2+依赖性的，需要胞质溶胶中Ca2+浓度的升高。当DAG在质膜中出现时，胞质溶胶中的蛋白激酶C被结合到质膜上，然后在Ca2+的作用下被激活。同蛋白激酶A一样,蛋白激酶C属于多功能丝氨酸和苏氨酸激酶。蛋白激酶C是一种细胞质酶，在未受刺激的细胞中，PKC主要分布在细胞质中，呈非活性构象。一旦有第二信使的存在，PKC将成为膜结合的酶，它能激活细胞质中的酶，参与生化反应的调控，同时也能作用于细胞核中的转录因子，参与基因表达的调控，是一种多功能的酶。蛋白激酶C至少可通过两种途径参与基因表达的控制。一种途径是蛋白激酶激活一个磷酸化的级联系统，使MAP蛋白激酶磷酸化，磷酸化的MAP蛋白激酶将基因调节蛋白Elk-1磷酸化，使之激活。激活了Elk-1与一个短的DNA序列（称为血清反应元件，SRE）结合，然后与另一个因子（血清反应因子，SRF）共同调节基因表达。另一种途径是蛋白激酶磷酸化并激活抑制蛋白Iκ-B，释放基因调节蛋白NF-κ-B，使之进入细胞核激活特定基因的转录。

应用[4][5]

用于贝前列素钠对高糖损伤大鼠系膜细胞的保护作用及其机制研究

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)特有的微血管并发症之一,其特征性的病理改变包括系膜区细胞外基质(extracellular matrix,ECM)堆积、肾小球硬化及小管间质纤维化,最终导致进行性尿蛋白/白蛋白排泄的增加和肾功能的下降。DN的发病机制复杂,目前认为高血糖、肾血流动力学的异常、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)的增多、多元醇及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)途径的激活、氧化应激的产生等多种因素共同参与了DN的发生与发展。如何对糖尿病肾病进行有效地防治一直是临床关注的热点与难点。

单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)在糖尿病组织巨噬细胞浸润及炎症中起到了关键作用。MCP-1是一种能被多种细胞表达的,对单核细胞、T淋巴细胞等具有趋化作用的分泌型蛋白。MCP-1与其受体结合后,诱导下游黏附分子的表达,使单核细胞／巨噬细胞等向病变部位聚集而发挥其病理作用。高糖培养系膜细胞能够通过PKC与氧化应激的激活促进MCP-1的表达。阻断MCP-1与其受体结合能减少糖尿病小鼠肾组织巨噬细胞的浸润及TGFβ1、Ⅳ胶原的表达,有效地阻止DN肾小球硬化的进展。

参考文献

[1]Inhibition of Overactive Transforming Growth Factor-[Beta]Signaling by Prostacyclin Analogs in Pulmonary Arterial Hypertension[J].Ogo,Takeshi,Chowdhury,H M,Yang,Jun,Long,Lu,Li,Xiaohui,Cleuren,Yamila N Torres,Morrell,Nicholas W,Schermuly,Ralph T,Trembath,Richard C,Nasim,Md Talat.American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology.2013(6)

[2]Vascular effects of prostacyclin:does activation of PPARδplay a role?[J].Zvonimir S.Katusic,Anantha V.Santhanam,Tongrong He.Trends in Pharmacological Sciences.2012(10)

[3]Inflammation in Diabetic Nephropathy[J].Andy K.H.Lim,Gregory H.Tesch,Oreste Gualillo.Mediators of Inflammation.2012

[4]PGI2 as a Regulator of Inflammatory Diseases[J].Stacy L.Dorris,R.Stokes Peebles,Nicolas Flamand.Mediators of Inflammation.2012

[5]张倩.贝前列素钠对高糖损伤大鼠系膜细胞的保护作用及其机制研究[D].南方医科大学,2013.