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人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒的应用
人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中p-PKC水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入p-PKC、生物素化的抗人p-PKC抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的p-PKC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 蛋白激酶C是G蛋白偶联受体系统中的效应物,在非活性状态下是水溶性的,游离存在于胞质溶胶中,激活后成为膜结合的酶。蛋白激酶C的激活是脂依赖性的,需要膜脂DAG的存在,同时又是Ca2+依赖性的,需要胞质溶胶中Ca2+浓度的升高。当DAG在质膜中出现时,胞质溶胶中的蛋白激酶C被结合到质膜上,然后在Ca2+的作用下被激活。同蛋白激酶A一样,蛋白激酶C属于多功能丝氨酸和苏氨酸激酶。蛋白激酶C是一种细胞质酶,在未受刺激的细胞中,PKC主要分布在细胞质中,呈非活性构象。一旦有第二信使的存在,PKC将成为膜结合的酶,它能激活细胞质中的酶,参与生化反应的调控,同时也能作用于细胞核中的转录因子,参与基因表达的调控,是一种多功能的酶。蛋白激酶C至少可通过两种途径
2020-07-08
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