龙血素B的合成方法和体内分布研究

背景及概述^[1]

龙血素B是来源于傣药龙血竭的一种查尔酮类化合物，有研究发现龙血素B具有很强的镇痛活性目前龙血素B主要是从傣药龙血竭中提取。

合成方法^[1]

步骤一：以1，3，5-三甲氧基苯（Ⅰ）为原料，通过Vilsmeier-Haauc酰化反应制备反应中间体2,4,6-三甲氧基苯甲醛（Ⅳ）。

在装有搅拌器并放入冰浴的250ml的三口烧瓶中，加入8.76g（0.12mol）DMF，再将9.8g（0.064mol）POCl3缓慢滴加到三口烧瓶中，反应0.5h后形成Vilsmeier配合物，再将10.10g（0.06mol）1，3，5-三甲氧基苯缓缓加到此络合反应液中。然后撤去冰浴，装上冷凝管，将反应瓶移至30℃的水浴里面搅拌反应3h生成中间体后，将中间体反应液倒入装有60ml的冰水的烧杯中，用玻璃棒搅拌混匀后，在烧杯口封上封口膜后放入4℃冰箱里冷却析晶，次日抽虑，得米白色粉末状产物8.8g，产率74.68%。

步骤二：以对羟基苯乙酮（Ⅱ）和苄基氯（Ⅲ）为原料，通过亲核取代反应制备中间体4-苄氧基苯乙酮（Ⅴ）。

室温下，在装有搅拌器的250ml的三口烧瓶中，依次加入DMF（50ml）、对羟基苯乙酮（10g，0.0735mol）、K₂CO₃（20.2g，0.147mol）和苄基氯（10.228g，0.0808mol），然后在室温下混合搅拌反应16h，反应毕，将反应混合物倒入装有60ml的冰水烧杯中，冷却，再抽虑得到沉淀，干燥可得16.2g白色粉末状目标产物，产率98.38%。

步骤三：以步骤一和步骤二制备的反应中间体（Ⅳ）和（Ⅴ）为原料，通过Claisen-Schmidt缩合反应，制备反应中间体2，4，6-三甲氧基-4′-苄氧基查尔酮（Ⅵ）。

在装有磁力搅拌器及冷凝管的100ml磨口三颈瓶中，依次加入10ml甲醇，4-苄氧基苯乙酮（2.26g，0.01mol），搅拌下加入由30ml甲醇和氢氧化钾(2.80g,0.10mol)配成的溶液，加热至50℃,待原料药溶解后，再加入2，4，6-三甲氧基苯甲醛（1.96g，0.01mol），加热回流，薄层色谱监控反应直到反应完成。停止反应，待冷却，抽滤，滤渣干燥，得黄色粉末状固体物质3.60g，即为目标产物，产率89%。

步骤四：将（Ⅵ）催化加氢还原为2，4，6-三甲氧基-4′-羟基二氢查尔酮（龙血素B，Ⅶ）。

在装有磁力搅拌器及冷凝管的100ml磨口三颈烧瓶中，依次加入甲醇（25ml）和2，4，6-三甲氧基-4′-苄氧基查尔酮（1.9g，0.005mol），搅拌下加入甲酸铵(1.8g，0.03mol)，10%Pd-C（0.2g）和甲醇（25ml），加热至回流，待反应完成后，过滤除去钯碳，滤液减压浓缩得到淡黄色油状物，加入适量丙酮溶解，过滤除去多余的甲酸铵，再减压浓缩得到油状物，真空干燥，得到淡黄色固体物质，用柱层析分离得到白色固体粉末即龙血素B1.11g，产率70%。龙血素B，又称2，4，6-三甲氧基-4′-羟基二氢查耳酮，为白色粉末状固体。所得产物经检测核磁，光谱数据如下：

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D6):δ2.78(2H,dd,J=9.5Hz,J=5.8Hz,-CH2Ar),2.99(2H，dd,J=9.6Hz,J=5.9Hz,-CH2CO),3.74(6H,s,-OCH3),3.76(3H,s,-OCH3),6.22(2H,s,H-2,5),6.85(2H,d,J=8.7Hz,H-3’,5’),7.84(2H,d,J=8.7Hz,H-2’,6’),10.32(1H,s,OH-4’)；

¹³C-NMR(125MHz，DMSO-d6)δ：198.1（C=O），161.9（C-4’），159.3（C-2,6），158.3（C-4），130.5（C-2’,6’），128.1（1’），115.2（C-3’,5’），108.6（1），90.7（C-3,5），55.6（2,6-OCH3），55.2（4-OCH3），37.9（C-α），18.3（C-β）。

经核磁分析，步骤四所得产物的分子式C18H20O5，其核磁图谱与已公开的龙血素B的核磁图谱相符。

体内分布研究^[2]

郭晶晶等人研究了传统名贵傣药龙血竭中有效成分龙血素B在大鼠体内重要组织的分布情况,同时探讨长期模拟失重效应对龙血素B分布的潜在影响。将SD大鼠分为正常重力组和模拟失重效应组,采用21 d大鼠尾悬吊方法模拟长期失重效应,单次灌胃给予大鼠25 mg/kg龙血素B,于给药1 h后收集心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、脑、睾丸和骨骼肌10种组织,采用HPLC-MS/MS方法测定各组织中龙血素B质量分数。在正常重力组中,龙血素B在肝、胃分布较多,其次是肾、肠、心、脾、骨骼肌和肺,脑中最少。与正常重力组相比,模拟失重效应组大鼠肝中龙血素B的质量分数显著升高47.7%(p<0.05),脑中质量分数上升5.4倍(p<0.05);在肠和肾中质量分数显著下降52.7%和22.0%(p<0.05);在大鼠胃、心、肺、脾、睾丸和骨骼肌中质量分数无显著变化。龙血素B的分布具有明显组织特异性,长期模拟失重效应显著改变龙血素B在大鼠肝、肠、脑、肾等重要组织的分布. 

参考文献

[1] [中国发明,中国发明授权] CN201710519342.8 一种龙血素B的衍生物及其制备和应用

[2]郭晶晶,李玉娟,陈博,康丽婷,王识博,李勇枝,王佳平,高建义.龙血素B在模拟失重效应大鼠体内的分布研究[J].北京理工大学学报,2020,40(02):206-212.