植物基因组DNA快速提取试剂盒

概述^[1-2]

试剂盒是一种将测定一种成分所需要的2种或2种以上的试剂及实验室一般用品连同操作说明书包装在一起，形成商品化的试剂单位，即由厂家提供给用户使用的一种套装试剂，使用者除用自备的蒸馏水或试剂盒提供的缓冲液进行复溶试剂的操作外不需要作任何试剂配制。目前检测试剂已广泛采用这一方式提供，kit的应用不但节约人力减少配制误差，而且有利于试剂质量的保证和实验室间方法学的统一，提高了可比性。

植物基因组DNA快速提取试剂盒用改进的经典CTAB植物DNA抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质（根据需要，上清中还加入异丙醇离心沉淀基因组DNA，进一步去除其它各种杂质），然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

组成^[3]

产品特点^[3]

1.植物基因组DNA快速提取试剂盒离心吸附柱内硅基质膜全采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。

3.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项^[3]

1.植物基因组DNA快速提取试剂盒所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

3.需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇（体积比24：1混合）、无水乙醇和β-巯基乙醇。

4.结合液PQ和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5.不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。

6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

7.本试剂盒是按照标准提取过程配置各溶液体积，如果样品DNA含量低或者产量低，需要扩大提取量，还需要另外购买溶液。

案例^[2]

脑心通胶囊地龙药材的DNA分子鉴别。本方法采用蛋白酶K消化动物药组分，广谱植物基因组DNA快速提取试剂盒提取胶囊中的植物药组分。基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ设计3对地龙特异性引物进行PCR扩增；将产物电泳检测测序，所得序列在GenBank数据库中用BLAST进行判定，以相似性最高的序列对应物种为最接近物种。本发明的地龙特异性引物可扩增200?350bp的小片段基因，不受地龙的外在形态限制，避免了DNA降解造成的影响，具有专属性强，准确通用的优点。本方法可针对含地龙细粉的中药制剂进行地龙成分鉴定，填补了脑心通胶囊在地龙质量控制方面的空白，提高了该药的质量控制水平。

主要参考资料

[1] 协和医学词典

[2] CN201910212299.X一种脑心通制剂中地龙药材的DNA分子鉴别方法

[3] 植物基因组DNA快速提取试剂盒操作说明