病毒DNA提取试剂盒

概述^[1]

病毒是一类个体微小，结构简单，只含单一核酸，必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型微生物。病毒在自然界分布广泛，可感染人体细胞，在细胞内解体释放出核酸分子，借细胞内环境的条件以独特的生命活动体系进行复制，常引起人体发病。目前知道的DNA病毒有乙肝病毒，T2噬菌体，天花病毒，花椰菜花叶病毒等，本发明适用于所有的感染人类的血液中的病毒基因组DNA的提取，在已知的DNA病毒中，因为乙肝病毒对人类的影响和危害，传染性最强，因此本发明尤其适用于乙肝病毒基因组DNA的提取。

目前DNA检查已有逐步取代血清学检查(ELISA检测)的趋势，尤其是乙肝病毒的检测，乙肝病毒DNA检测已经成为临床乙肝病毒诊断的主要方法之一。要进行病毒DNA检查，首先步也是最关键的一步便是要提取人体血液中病毒基因组DNA。

目前，提取乙肝病毒DNA的方法很多，有煮沸法、沉淀法、吸附法等，但这些方法有一个共同缺点：首先必须对血液进行血浆和血清分离，用分离后的血清作为提取病毒DNA的标本，这将造成以下几个问题：1)步骤繁琐，增加工作量；2)操作过程中易二次污染，造成假阳性结果；3)在分离时易造成病毒DNA的损失，对于微量病毒DNA检测有影响，甚至检测不到，形成假阴性结果。因此，不用进行血清和血浆分离，研发一种直接从人体全血中病毒DNA提取试剂盒和方法意义重大。

适用范围

病毒DNA提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组，不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

组分^[2]

（1）病毒DNA提取试剂盒中的WashingBuffer中已经加乙醇，无需单独添加。

（2）VirusDNA/RNALB1，储存时可能会有白色结晶沉淀，放置于56℃水浴锅溶解后，不影响使用效果。

（3）蛋白酶K（20mg/ml）长期保存请储存于-20℃，短期室温保存（6个月），其它组分储存于室温。

特征^[2]

毒DNA提取试剂盒仅需10min即得到高质量病毒DNA和RNA。操作简单，无有机抽提或乙醇沉淀。重复性强，产量高。完全去除污染物和抑制剂，方便下游应用。

案例^[2]

应用病毒RNA提取试剂盒(B0129)从含（107copies/ml，106copies/ml，105copies/ml，104copies/ml，103copies/ml）丙型肝炎病毒（HCV）的血清样品中纯化得到病毒RNA，逆转录后进行qPCR，如图所示，可检测并稳定扩增103copies/ml的HCV病毒（每个PCR体系中约含10copies的HCV病毒分子）。

主要参考资料

[1] 协和医学词典

[2] 病毒RNA提取试剂盒操作说明