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牛肉膏的应用

发布日期:2020/3/2 14:48:38

背景及概述[1-2]

牛肉膏是以牛肉的抽出液浓缩而成的制品,含可溶性含氮化合物50%,可作微生物培养基。目前,牛肉膏是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基,牛肉膏在常温下是流态物质,但粘度非常高、不易分离的,随着温度升高粘度就会急剧下降,变得易于分离。

在配制培养基需用到牛肉膏时,对于牛肉膏的称量常用玻璃棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯,或放在称量纸上,称量后直接放入水中,稍微加热后牛肉膏与称量纸分离,把称量纸从烧杯中取出。但是由于牛肉膏在常温下粘度大、不易分离等特性,使用玻璃棒之类的仪器很难一次性准确地挑取一定量的牛肉膏放到小烧杯、表面皿或称量纸上,需反复做挑取多次才能得到符合要求重量,在很多时候最终称量的重量跟实际要求的重量存在较大的误差。

应用[3-6]

牛肉膏主要可用作培养基,其应用举例如下:

1)用于一种低温好氧反硝化菌的富集分离。包括如下步骤,(1)制备底泥悬浊液和富集培养液,并将底泥悬浊液与富集培养基混合进行数轮的富集培养获得低温好氧反硝化菌群;(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基和牛肉膏蛋白胨液体培养基,对牛肉膏蛋白胨固体培养基进行高温灭菌处理并制得固体平板;(3)对步骤(1)中得到的低温好氧反硝化菌群进行单菌落分离,得到单菌落;并将得到的单菌落接种于步骤(2)中的灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基,并进行杜氏管产气检验,得到低温好氧反硝化菌株;(4)利用牛肉膏蛋白胨液体培养基对获得的低温好氧反硝化菌株进行发酵培养得到低温好氧反硝化菌液。

2)用于分离反硝化细菌,首先制备牛肉膏一蛋白胨液体培养基,加入琼脂后加热灭菌,冷凝成平板固体培养基,然后将混合微生物菌群均匀涂布于牛肉膏一蛋白胨平板,静置冷凝后于生化培养箱30℃下培养7-10天,在形成的菌落中挑取单菌落到牛肉膏一蛋白胨平板划线纯化得到纯菌,然后将纯菌菌苔接种于氨氧化能力鉴定培养液,采用格利斯试剂直接点滴入适量培养液中进行硝化活性鉴定,鉴定试验以不接纯化菌株的氨氧化能力鉴定培养液作空白对照。本发明通过牛肉膏一蛋白胨琼脂平板分离,氨氧化能力鉴定液体培养基培养和格利斯试剂显色等步骤,可从混合微生物系中分离筛选反硝化细菌,具有简便,重复性好,准确可靠的特点。

3)用于制备固定化枯草芽孢杆菌:一、配制牛肉膏蛋白胨培养液;二、活化枯草芽孢杆菌;三、将经过处理的远红外细菌屋放入牛肉膏蛋白胨培养液中,然后在无菌的环境下加入枯草芽孢杆菌菌悬液,在30℃恒温培养箱中固定培养,即得。处理污水的方法:将25-35g固定化枯草芽孢杆菌加入到灭菌的有机污水中,在恒温培养,即完成。采用本发明方法得到的远红外细菌屋固定枯草芽孢杆菌处理模拟高浓度有机污水的COD去除率为34%。本发明属于水处理领域。

4)用于一种海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白的制备,步骤为:取海胆卵研磨,将研磨液涂布于牛肉膏蛋白胨平板培养基上,37℃恒温培养2天;挑取单菌落反复划线培养至纯菌株;得海胆共生多粘芽孢杆菌DNC2;将DNC2菌株在pH9的牛肉膏蛋白胨液体培养基中35℃发酵1天,牛肉膏蛋白胨液体培养基中牛肉膏和蛋白胨所占的质量百分比分别为3%和6%;4000r/min离心去除菌体,在上清液中加入硫酸铵,硫酸铵的饱和终浓度为60%,4℃静置过夜,10000r/min离心处理30min,将沉淀物用PBS缓冲液溶解后,再用截留分子量为3500道尔顿的透析袋透析4天,得海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白。本方法操作简单、成本低廉。

主要参考资料

[1] 中国百科大词典

[2] CN201510512628.4牛肉膏量取器

[3] CN201710985946.1低温好氧反硝化菌的富集分离方法及水体治理方法

[4] CN201310079767.3一种分离反硝化细菌的方法

[5] CN201310123176.1固定化枯草芽孢杆菌的制备方法及采用固定化枯草芽孢杆菌处理污水的方法

[6] CN201310034685.7一种海胆源多粘芽孢杆菌抗肿瘤活性蛋白的制备方法及其应用

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