伏立康唑N-氧化物的检测方法

背景及概述^[1]

伏立康唑(voriconazole，VＲCZ)为新一代广谱三唑类抗真菌药，该药在氟康唑结构丙基骨架上加入一个甲基，并用一个氟代嘧啶环取代了氟康唑的一个三唑环，大大增强了其抗菌谱和抗菌活性。伏立康唑是目前临床上广泛使用的抗真菌药物之一，具有抗菌谱广口服生物利用度高等特点，抗菌谱主要包括急性侵袭性曲霉菌、侵袭性念珠菌属、足放线病菌属和镰刀菌属等，还可以用于预防侵入性真菌感染免疫功能低下的患者。但由于伏立康唑药代动力学个体差异大，药动学具有复杂性，且与免疫抑制剂如环孢素A、他克莫司等很多药物相互干扰作用，其血药浓度与临床疗效和不良反应，如肝功能异常视觉改变或视觉障碍等显著相关，因此临床治疗过程需进行伏立康唑的治疗药物监测。伏立康唑的主要代谢物为伏立康唑N-氧化物(voriconazoleN-oxide，VNO)，主要通过细胞色素CYP450氧化酶包括CYP3A4、CYP2C19和CYP2C9代谢，其中CYP2C19是主要的代谢酶。伏立康唑N-氧化物抗真菌活性弱，研究表明伏立康唑N-氧化物可以抑制CYP3A4或CYP2C19的体外代谢活性。伏立康唑N-氧化物浓度的测定可能有助于确定伏立康唑向伏立康唑N-氧化物转化的主要代谢途径中伏立康唑浓度是否存在个体间变异，并进一步评估伏立康唑N-氧化物潜在的副作用。国外相关文献报道采用高效液相色谱法对伏立康唑和伏立康唑N-氧化物进行血药浓度测定，而目前国内对伏立康唑的治疗药物监测主要采用高效液测定，但未见对其代谢产物伏立康唑N-氧化物进行测定的相关报道。

检测方法

有研究建立同时测定人血浆中伏立康唑和伏立康唑N-氧化物浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法，并应用于临床伏立康唑的治疗监测。方法酮康唑为内标，经甲醇沉淀蛋白后进行LC-MS/MS分析。电喷雾离子源，正离子模式监测，检测离子伏立康唑m/z350.1→m/z127.0，伏立康唑N-氧化物m/z366.1→m/z224.0，酮康唑(内标)m/z531.0→m/z82.1;色谱柱为InertsilODS-3(2.1mm×50mm，5μm)，流动相为甲醇∶10mmol/L乙酸铵溶液(90∶10)。运用本法对伏立康唑和伏立康唑N-氧化物血药浓度测定。结果伏立康唑和伏立康唑N-氧化物在0.4～10.0μg/mL浓度范围内线性良好(r＞0.999)，最低定量限为0.4μg/mL。批内、批间精密度及基质效应ＲSD均小于15%。样本储存和处理过程中，化合物稳定良好。23例患者伏立康唑稳态谷浓度为0.4～14.3μg/mL，伏立康唑N-氧化物稳态谷浓度为0.5～7.2μg/mL，个体间差异较大。建立的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法操作简便，特异性强，灵敏度高，可应用于临床治疗药物监测。

主要参考资料

[1] 液相色谱-串联质谱法测定人血浆中伏立康唑和伏立康唑氮氧化物浓度及其临床应用