盐酸克伦特罗的残留检测方法

概述^[1-2]

盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,是一种β2-肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗。

危害性^[2]

1对猪的影响

在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。

2对人的影响

人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。

禁用规定^[2]

由于盐酸克伦特罗对猪具有加强脂肪分解,促进蛋白质合成,实现动物营养再分配,提高胴体瘦肉率,加快猪的生长等作用,盐酸克伦特罗曾作为科研成果推广,从而使多起摄入残留“瘦肉精”的消费者中毒案件发生,严重的甚至导致了死亡。

就国内而言,自1998年以来,每年都有数起类似中毒事件发生。今年双汇“瘦肉精”事件更是引起了广泛的关注。从1986年开始,欧美等发达国家已严禁畜牧生产中应用盐酸克伦特罗,我国农业部在1997年3月以[农牧发(1997)3号文]严令禁止β一肾上腺素类激动剂在动物生产中的应用。美国食品药物管理局(FDA)和世界卫生组织(WHO)建议CLB在动物组织中最高残留限量(MRL)分别为:肉0.2μg/kg,肝0.6μg/kg,肾0.6μg/kg,脂肪0.2μg/kg,奶0.05μg/kg。

残留检测方法^[2]

1感官辨别

屠宰前,凡呼吸急促,皮毛异常光亮,后臀部外形饱满且突出,四肢严重颤抖或非外因而卧地不起的猪,基本上可以做出初步判断。屠宰后,可以从肉的品质和颜色上来判断。含有盐酸克伦特罗的猪肉肉色较深,鲜艳,脂肪层非常薄,在胴体两侧腹股沟的脂肪层内毛细血管分布较密,甚至呈充血状态。内脏实质器官(心、肝、肾)充血肿胀,用手指触之酥软呈脂肪变性,间质器官如肺、气管切面见泡沫、气肿等病变特征,而一般健康肉呈淡红色,肉质弹性好。感官检验法可用于对含有盐酸克伦特罗动物性产品的粗略判断,主观性较强。

2实验室检测

目前对猪体内盐酸克伦特罗残留的检测方法主要有胶体金法、酶联免疫法、气相色谱法及液相色谱-质谱联用法。

2.1胶体金法

胶体金法是通过盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗-血清白蛋白偶联物竞争结合抗盐酸克伦特罗单克隆抗体-胶体金复合物,使试纸上反应线颜色发生变化,以判定样品中盐酸克伦特罗的含量。当检样中盐酸克伦特罗浓度低于最低检测水平时,胶体金中的抗盐酸克伦特罗单抗-胶体金复合物与T线上的偶联物结合,T线呈色与C线相近;当检样中盐酸克伦特罗浓度>0．5ng/mL时,T线显色比C线浅或完全看不到线,且盐酸克伦特罗浓度越高T线显色越浅,从而作出判定。在筛查饲养场、生猪中转站、屠宰场时可采用胶体金法进行快速检测,不须添置任何设备,不须掌握更多专业技能,在十多分钟内即可得到检测结果,适用于大量样品的测定,缺点是假阳性率较高。

2.2酶联免疫法

酶联免疫法是微孔板加入盐酸克伦特罗抗体,经过孵育及洗涤步骤后,加入盐酸克伦特罗酶标记物、标准和样品溶液。盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗酶标记物竞争,盐酸克伦特罗抗结合的盐酸克伦特罗酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质和发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入终止液后由蓝色转化为黄色,在450nm处测量吸光强度,吸光值与样品中盐酸克伦特罗浓度呈反比。目前,国内用于盐酸克伦特罗残留检测的试剂盒已经商品化,具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点,适于批量样品的快速分析测定．检测精度可达ng/mL级,此法假阳性率较少,因此国内外大都

将胶体金法作为筛选法。

2.3气相色谱法

气相色谱法是将样品经固相萃取、衍生化后用ECD检测器检测,以外标法多点校准定量,测得动物组织中盐酸克伦特罗的峰面积与样品浓度在0.005～1.0μg/ml范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999,肉样的加标回收率在70％～80％,最低检出限为1μg/kg。气相色谱法具有检测精密度高的优点,但同时也具有检测过程烦琐,耗时长、不能定性等缺点。

主要参考资料

[1]新中国60年新词新语词典

[2]宋瑞,张彩云,何立宁,张蕾.猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法[J].科技资讯,2011(15):104.