苦参醇E的制备方法

背景及概述^[1]

中药苦参为豆科植物苦参SophoraflvescensAit.的干燥根。始载于汉代神农本草经，列为中品，在2000多年来的临床实践中发挥了诸多功效。具有清热燥湿，杀虫，利尿的功能。临床用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；外治滴虫性阴道炎。苦参主要有下列药理活性：抗肿瘤作用、抗炎抑菌作用、抗病毒作用、免疫调节作用、抗肝损伤、抗过敏和平喘、降血糖、对酶的抑制作用、对中枢神经的抑制作用；此外苦参中的苦参碱和黄烷酮类化合物对胃粘膜损伤均有明显的保护作用，其异戊烯基二氢黄酮类化合物具有抗雄性激素样作用；苦参尚具有抗寄生虫、体外杀精、利尿、利胆、止泻等药效作用。苦参中主要含有生物碱和黄酮体两大类成分。生物碱为苦参的主要活性成分，至今已从中分离得到34种生物碱(包括喹诺里西啶类、金雀花碱型、臭豆碱型、鹰爪豆碱型、羽扇豆碱型和双呱啶类)，其中含量较高、活性较强的为氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱及槐果碱。苦参中另一大类成分为黄酮类化合物，至今已得到85个，具有八种结构类型，包括二氢黄酮类33个、二氢黄酮醇类22个、黄酮醇类(3‑OH取代)4个、异黄酮类8个、二氢异黄酮类9个、查尔酮类6个、双黄酮类2个以及其他类型的黄酮1个；其中的60个化合物均具有异戊烯基侧链。这些化合物中的异戊烯基侧链包括苦参醇A至苦参醇E五种类型以及两种与苯环成吡喃环形式的共七种类型，侧链均存在于A环上；大多数化合物则多以lavandulyl的分枝异戊烯基侧链及其羟基化形式存在于A环的C‑8位上。这是苦参的这类黄酮化合物区别于同属其他植物最明显的化学结构特征。

制备^[1]

乙醇提取物上聚酰胺吸附柱层析法制备苦参总黄酮提取物（包含苦参醇E）：苦参总黄酮其特征在于由野生或栽培的苦参的干燥根中提取获得。提取溶剂也可用70％以上的乙醇，但优选的为95％乙醇，因乙醇浓度高可以去除多糖、糖肽、蛋白等大分子物质的杂质干扰；提取方法曾用过浸渍加渗漉、超声提取，优选的为回流提取三次，次用8倍量提取2小时，第二、三次用6倍量提取1.5小时；过滤方法包括常压滤布过滤、离心或抽滤等，可依据实验条件选用；溶剂的浓缩方法优选为减压浓缩。将苦参干燥根粉碎成粗粉，按优选的方法用95%乙醇回流提取三次，滤过，滤液减压浓缩至近干得乙醇提取物。聚酰胺吸附柱可取30～60目聚酰胺(筛去细分)按常规预处理后，用纯净水浸泡搅拌至无气泡，湿法装柱，乙醇提取物以聚酰胺分散、干燥后置层析柱干法上样，先以水充分洗脱，直至用糖类显色试剂显示不含糖止；再以适量低浓度的乙醇(5～8%)洗脱，以除尽生物碱等杂质，该洗脱浓缩物和上述水洗脱浓缩物一并另器保存。提高洗脱液乙醇的浓度至10～20%，经减压回收溶剂，以黄酮体的鉴别试剂检测浓缩的洗脱液(如：三氯化铝乙醇试剂、盐酸‑镁粉试剂、浓氨水溶液等)，收集含三叶豆紫檀苷及其它黄酮体的浓缩液段A；逐级提高洗脱液乙醇浓度至30%～80％，分部收集洗脱液，减压回收溶剂，时时用黄酮类检测试剂检查，得到含不同酚羟基的黄酮类化合物B，50～60％乙醇洗脱液减压浓缩后得量最高，活性物质苦参酮和降苦参酮等包含于此，最后用95％或无水乙醇把黄酮体洗脱净，得到含酚羟基较多的黄酮类化合物C，把上述A、B和C合并得到了总黄酮提取物；也可以根据需要而合并某些部位得到了以某些化合物为主的黄酮提取物。实验中也用了更简便的方法即得到了A浓缩液段后，直接用95％或无水乙醇洗脱，洗脱浓缩液加上A物，亦为总黄酮提取物。苦参总黄酮提取物经HPLC‑MS‑MS(负离子)分析表明，主要含有下列化合物：三叶豆紫檀苷、苦参醇、(2S)‑8‑异戊烯基‑5‑甲氧基‑7，2’，4’‑三羟基‑5‑甲氧基二氢黄酮、苦参醇Q、苦参醇I、苦参醇N、5‑甲氧基苦参醇C、苦参酮、苦参醇C、苦参醇X、降苦参酮、苦参醇L、苦参醇E、苦参啶、苦参醇A等。

主要参考资料

[1] CN201210469050.5一种苦参总黄酮提取物及其制备方法、质量检测方法