结晶紫中性红胆盐琼脂的制备

背景及概述^[1]

结晶紫中性红胆盐琼脂是平板计数法中的选择性计数培养基，使用量巨大。现行的国标规定ＶＲＢＡ的配制需煮沸2min3次，耗时费力且操作容易有烫伤和培养基喷射的危险。如何配制高效ＶＲＢＡ、减少实验中的操作风险，已成为食品微生物实验室检测大肠菌群面临的一个急需解决的问题。

制备^[1]

结晶紫中性红胆盐琼脂用于大肠菌群的固体平板检测。

1）用于检测原料胶中大肠菌群含量。方法包括：(1)将原料胶置于含有生理盐水的无菌均质袋中，进行均质处理，得到均质处理产物；(2)将均质处理产物置于无菌均质袋中，再向无菌均质袋中加入结晶紫中性红胆盐琼脂培养基，并进行第二均质处理，得到第二均质处理产物；(3)将含有第二均质处理产物的均质袋进行平整化处理；(4)将经过平整化处理的含有第二均质处理产物的均质袋进行静置培养，得到可疑大肠菌群菌落；以及(5)将可疑大肠菌群菌落接种于含有煌绿乳糖胆盐肉汤培养基的试管中进行培养，以便确定大肠菌群菌落数，进而确定对原料胶中大肠菌群含量。本发明的方法能够有效提高检出率，准确性强。

2）制备一种大肠菌群选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：结晶紫中性红胆盐琼脂15-25g、特异性酶显色底物5-25g、二甲基甲酰胺0.05-20g、酵母粉1-5g、乳糖1-8g、氯化钠5-10g、磷酸氢二钾3-5g、磷酸二氢钾0.5-2g、月桂基硫酸钠0.1-0.3g。本发明还提供了一种含有所述大肠菌群选择性显色培养基的检测试纸。本发明采用两种特异性酶显色底物进行复配使用，其对于大肠菌群的特异性和敏感度较单独使用任何一种显色底物显著增强，且检出率高、检出时间短。

主要参考资料

[1] 结晶紫中性红胆盐琼脂配制中煮沸与高压灭菌效果比较

[2] CN201511001131.2检测原料胶中大肠菌群含量的方法

[3] CN201410682129.5大肠菌群选择性显色培养基及其检测试纸