人食管平滑肌细胞提取物的应用

背景^[1-6]

人食管平滑肌细胞提取物提取人食管平滑肌细胞，人食管平滑肌细胞提取于人食道组织。平滑肌的主要功能是负责空腔脏器的收缩，如血管、胃肠道、膀胱以及子宫等器官。它的结构与骨骼肌有很大的不同。人食管壁包括三层，外纵形和内环形，中间肌层是黏膜层。人食管的蠕动是由平滑肌收缩严格控制。平滑肌的收缩可能是通过两条不同的途径激活磷脂酶（增加细胞内Ca2+浓度和激活G蛋白）并激活PKC-epsilon依赖的信号通路。在体外培养研究表明人食管平滑肌细胞可以表达Na(+)通道。

平滑肌细胞又叫平滑肌纤维，系构成平滑肌的纤维状长细胞。由于平滑肌所分布的部位不同，平滑肌细胞的长度很不一致，在小血管壁上的平滑肌细胞长度仅有20μm左右，妊娠期子宫壁平滑肌细胞可长达500μm，位于一般器官平滑肌细胞的长度约200μm左右，此细胞的宽度在7μm以内。平滑肌细胞多聚集成束，细胞轮廓不清，需用适当浓度的酸(碱)溶液将其分离，方可获得外形完整的肌细胞。细胞内只有1个细胞核，呈椭圆形或长杆状，位于细胞中段最宽的部分，长度与纵轴平行，核染色质为纤细网状，可见2个以上核仁。

应用^[7][8]

可用于人食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌舒缩信号分子表达的初步研究：

以酶消化法（enzymatic digestion with tissue blocks,ED）和组织块法（explant culture with tissue blocks,EC-T）进行平滑肌细胞原代培养。ED组中,消化酶选择胶原酶Ⅱ（collagenaseⅡ）和胰酶/EDTA消化液（Trypsin/EDTA）,并以不同消化酶浓度结合不同消化温度和消化时间探索获取原代细胞方法,记录每200倍镜视野可见贴壁细胞个数（Cells/200×）和原代细胞生长至次传代所需时间（first passage day,FPD）。

EC-T组中,对比传统组织块贴壁法（explant culture with tissue blocks,T）与胰酶消化辅助法（explant culture with trypsin digested-tissue,TD-T）和直接利用酶消化法中组织块内注射胶原酶Ⅱ提取细胞后的剩余组织块（explant culture with enzyme injected-tissue,EI-T）三种方法,记录初次见到细胞由组织块爬出时间（visibility of cells migration,VCM）、FPD、初次分瓶时已爬出细胞的组织块所占比例（Positive blocks（%））,选择效率最高的原代细胞培养方法。

参考文献

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[7]Selective?nh?bition of nitric oxide synthase causes increased muscle thickness in rat esophagus[J].Tutku Soyer,?zlem Boybeyi,Pinar Atasoy.Journal of Pediatric Surgery.2014

[8]高杨.人食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌舒缩信号分子表达的初步研究[D].河北医科大学,2018.