小鼠大隐静脉内皮细胞试剂盒的应用

背景^[1-4]

小鼠大隐静脉内皮细胞试剂盒适用于小鼠大隐静脉内皮细胞的原代及传代培养，试剂包含原代培养中需要的组织分离试剂可以有效分离原代小鼠大隐静脉内皮细胞。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以程度地降低所培养的大隐静脉内皮原代细胞中成纤维细胞的含量。试剂盒包含：（1）OptiTDSTM小鼠大隐静脉内皮细胞组织解离液；（2）小鼠大隐静脉内皮细胞组织处理缓冲液。

大隐静脉起于足背静脉弓内侧端，经内踝前方，沿小腿内侧缘伴隐神经上行，经股骨内侧髁后方约2cm处，进入大腿内侧部，与股内侧皮神经伴行，逐渐向前上，在耻骨结节外下方穿隐静脉裂孔，汇入股静脉，其汇入点称为隐股点。其中，小鼠大隐静脉内皮细胞分离自正常小鼠大隐静脉内皮，呈单层扁平分布。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最少的微血管。

虽然大隐静脉内皮组织机械韧性很强，但利用试剂盒中提供的大隐静脉内皮组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的大隐静脉内皮组织能使得大隐静脉内皮细胞的一些功能特性发生改变，从而将大隐静脉内皮细胞分离开来。

应用^[5][6]

可用于血管平滑肌细胞和内皮细胞在小鼠血管损伤模型中的分子机制研究：

血管平滑肌细胞系谱追踪目的:血管平滑肌细胞是构成血管壁组织结构及维持血管张力的主要细胞成分,其结构及功能的改变是导致高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等多种心血管病的细胞病理学基础。运用转基因小鼠股动脉的损伤模型模拟临床的血管内膜损伤,通过谱系追踪血管平滑肌细胞的增生、迁移和功能变化来探讨血管损伤后血管重构的病理机制。

方法:运用可诱导的平滑肌细胞特异性标记的转基因小鼠SM22Cre与带有报告基因YFP（黄色荧光蛋白）的小鼠杂交,繁殖出可在诱导剂Tamoxifen注射后,YFP在平滑肌细胞特异表达的转基因小鼠SM22CreYFP。并模拟临床金属支架术,建立小鼠股动脉内膜损伤模型,设立术后0天（未损伤）、术后1天、术后7天、术后14天和21天5个时间点。于各时间点取组织进行免疫化学染色和计数观察。

结果:未损伤时,血管中膜约50%平滑肌细胞被诱导激活,即表达黄色荧光蛋白（YFP）,损伤21天后,血管中膜YFP的表达率降为10%,而新生内膜则出现50%YFP表达阳性的平滑肌细胞。结论在血管损伤后血管发生了重构,新生内膜的平滑肌细胞来源于中膜的平滑肌细胞。有少数新生内膜细胞来源于外膜的CD146阳新细胞。

内皮细胞作为构成的血管内膜的主要细胞,对于血管损伤后它们的形态学、体外培养和扩增,以及与平滑肌细胞之间相互关系的研究具有重要的意义。运用转基因小鼠颈静脉-股动脉移植模型模拟临床的冠脉大隐静脉搭桥术后血管损伤,通过谱系追踪血管损伤后血管重构,血管内皮细胞的增生和分化病理机制。

参考文献

[1]PCI or CABG in coronary artery disease?[J].David P Taggart.The Lancet.2009(9670)

[2]Post-translational regulation of the tumor suppressor p27 KIP1[J].J.Vervoorts,B.Lüscher.Cellular and Molecular Life Sciences.2008(20)

[3]Impact of Additional Ballooning on Plaque Prolapse After Stent Implantation in Patients With Acute Myocardial Infarction[J].Hideaki Kaneda,Yasuhiro Honda,Peter J.Fitzgerald.JACC:Cardiovascular Imaging.2008(6)

[4]A Perivascular Origin for Mesenchymal Stem Cells in Multiple Human Organs[J].Cell Stem Cell.2008(3)

[5]Induction of EMT by Twist Proteins as a Collateral Effect of Tumor-Promoting Inactivation of Premature Senescence[J].Stéphane Ansieau,Jeremy Bastid,Agnès Doreau,Anne-Pierre Morel,Benjamin P.Bouchet,Clémence Thomas,Frédérique Fauvet,Isabelle Puisieux,Claudio Doglioni,Sara Piccinin,Roberta Maestro,Thibault Voeltzel,Abdelkader Selmi,Sandrine Valsesia-Wittmann,Claude Caron de Fromentel,Alain Puisieux.Cancer Cell.2008(1)

[6]方芳.血管平滑肌细胞和内皮细胞在小鼠血管损伤模型中的分子机制研究[D].中南大学,2009.