人小肠粘膜上皮细胞提取物的应用

背景^[1-6]

人小肠粘膜上皮细胞提取物是从人原代小肠粘膜上皮细胞提取的，人原代人小肠粘膜上皮细胞从正常人小肠粘膜上皮组织制备。正常人小肠粘膜上皮组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。人小肠粘膜上皮细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

人小肠黏膜上皮细胞分离自小肠组织；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的重要防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为首先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。

应用^[7][8]

可用于HO-1/hUC-MSCs对受损肠粘膜上皮细胞修复作用及其机制的研究：

1.采用直接组织块法分离培养脐带间充质干细胞,用细胞表型、成脂成骨诱导分化方法鉴定：将带有荧光标记绿色荧光蛋白和HO-1基因的质粒与腺病毒重组,将重组的腺病毒转染入hUC-MSCs中,形成稳定表达的HO-1/hUC-MSCs,通过荧光显微镜下观察绿色荧光的含量和通过RT-PCR技术检测HO-1mRNA的含量来验证HO-1是否转染入细胞内并进行了过表达。

2.采用Caco-2细胞来模拟肠粘膜上皮以期研究肠粘膜上皮细胞的一些结构和功能的变化。应用TNF-α处理Caco-2细胞建立肠粘膜上皮损伤模型。通过免疫荧光技术、RT-PCR技术和Western blot技术验证了本实验条件下TNF-α的浓度和处理时间。

3.将HO-1、hUC-MSCs及HO-1/hUC-MSCs通过Transwell、室进行间接共培养,采用RT-PCR技术证明了Ad-HO-1转入了细胞并进行了大量的表达,同时采用免疫荧光、RT-PCR及Western blot技术检测Caco-2细胞上紧密连接蛋白的形态及Occludin与ZO-1的含量变化,采用ELISA方法检测IL-10及IL-6等细胞因子的变化。

参考文献

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[6]Heme Oxygenase-1 Is Protective Against Nonsteroidal Anti-inflammatory Drug–induced Gastric Ulcers[J].Aliye Uc,Xiaoyan Zhu,Brett A.Wagner,Garry R.Buettner,Daniel J.Berg.Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition.2012(4)

[7]Carbon monoxide:An unusual drug[J].FrancescaGullotta,Alessandra diMasi,PaoloAscenzi.IUBMB Life.2012(5)

[8]吴本娟.HO-1/hUC-MSCs对受损肠粘膜上皮细胞修复作用及其机制的研究[D].天津医科大学,2014.