烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(缩写为NAD)，也称为二磷酸吡啶核苷酸(缩写为DPN)，或 辅脱氢酶Ⅰ或辅酶Ⅰ。在哺乳动物体内存在氧化型(NAD+)和还原型(NADH)两种状态，氧化型 (NAD+)在260nm处具有最大紫外吸收光谱，通过各种脱氨酶，从底物中接受一个氢原子和一个电子，变成还原型(NADH)，在340nm处有最大吸收。
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在氧化还原反应中用作辅酶，在ADP核糖基化反应中作为ADP核糖部分的供体，也作为第二信使分子环ADP核糖的前体。β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还充当细菌DNA连接酶和一组称为sirtuins的酶的底物，这些酶使用NAD+从蛋白质中去除乙酰基。

CN201511022464.3提出的一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，包括如下步骤：

S1、破碎细胞：将酵母细胞加入盐酸水溶液中浸泡0.5-2.5h，进行温差破壁处理 后，用陶瓷膜过滤，取滤液得到清液A；

S2、浓缩：取S1中得到的清液A超滤，取超滤液纳滤得到浓缩液B，用盐酸水溶液调 节浓缩液B的pH＝2-2.5得到浓缩液C；

S3、洗脱：将S2中得到的浓缩液C过D152树脂柱，用氨水洗脱，收集洗脱液D，用盐酸 水溶液调节洗脱液D的pH＝7-8后，过717树脂柱，用氯化钾水溶液洗脱，收集得到综合液E；

S4、分离：将S3中得到的综合液E纳滤得到浓缩液F；用硝酸水溶液调节浓缩液F的 pH＝1-3，加丙酮沉淀，离心得到固体G；

S5、纯化：将S4中得到固体G加水溶解，过制备色谱，脱盐，分离，收集分离液，浓缩， 冻干得到烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是一种辅酶类药。临床上主要用于冠心病的辅助治疗，能改善胸闷、心绞痛等症状。不良反应偶见口干、头晕、恶心等。

以酵母为原料制得烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
破壁、提取、分离 将新鲜压榨酵母搅拌下加入等量的沸水，加热至95℃保温5min，迅速加入两倍酵母质量的冰块，过滤，滤饼用水洗涤2次，合并滤液和洗液，加入强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7(717)，搅拌16h，过滤，收集滤液。
新鲜压榨酵母[沸水、冰块]→提取液[201×7树脂]→滤液
吸附、洗脱 滤液用浓盐酸调pH=2-2.5，经弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂122柱吸附，用无热原水洗至流出液澄清为止，再用0.3mol/L氢氧化铵溶液洗脱，当流出液呈淡咖啡色，经340nm分光光度计测定吸光度大于0.05时，开始收集，流出液呈淡黄色时停止，得洗脱液。
滤液[pH2-2.5]→吸附物→洗脱液
中和、吸附 将强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×7(732)加至洗脱液中，搅拌测pH=5-7，过滤，滤饼用无热原水洗涤，合并洗液和滤液，加稀氨水调pH值至7(约15%)，再用强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7 (717)50-60目柱进行吸附，用无热原水洗至流出液澄清无色为止。
洗脱液[001×7树脂，氨水，201×7树脂]→[pH7]吸附物
洗脱、吸附、洗脱 将766型活性炭60-80目柱与201×7树脂柱串联，用0.1mol/L氯化钾溶液洗脱，洗脱液立即流经活性炭柱进行吸附，吸附完后解除两柱串联，用pH9的无热原水洗涤，再用pH8的4%乙醇洗涤，最后用无热原水洗至中性，用体积比为丙酮：乙酸乙酯：水：浓氨水=4：1：5：0.02的混合液洗脱，当洗脱液加3倍丙酮产生白色浑浊时，收集洗脱液。
吸附物[201×7树脂柱，氯化钾，766型活性炭]→洗脱液[活性炭柱]吸附物[无热原水，乙醇]→[洗至中性]吸附物[丙酮，乙酸乙酯，水，浓氨水]→洗脱液
沉淀、干燥 洗脱液在搅拌下加30%-40%硝酸调pH=2-2.5，过滤，冰库过夜，过滤，95%的冷丙酮洗涤，真空干燥，得成品。
洗脱液[硝酸]→[pH2-2.5, 0℃]沉淀[丙酮]→[干燥]C₀I成品。