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61970-00-1

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基本信息

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荧光素酶
CAS
61970-00-1

常见问题列表

概述
生物发光(Bioluminescence)是在自然界广泛存在的、有生命的生物产生的一种发光现象.发光的生物种类很多,包括发光细菌、发光萤火虫、发光鱼、发光海星、发光甲虫等.而能催化荧光素或脂肪醛氧化产生生物发光的一类酶即为荧光素酶(Luciferase).从20世纪50年代就已经开始了对荧光素酶的研究.从1986年第一个成功地获得表达萤火虫荧光素酶基因(luc基因)的转基因烟草以来,荧光素酶的应用和发展进入了一个崭新的时代.应用荧光素酶大大增加了生物发光免疫分析技术(BLIA)的灵敏度和应用范围,并且由于具有敏感性高,特异性好,反应迅速,操作简单,应用范围广等优点,已成为医学、生物学、环境科学等研究领域中一种新的手段。
种类
自然界中具有发光能力的生物种类很多,常见的主要有:发光蘑菇(Luminousmushrooms)、发光蚯蚓(Luminousearthworms、发光细菌(Luminousbacteria)、发光水母(Luminousjellyfish)、发光甲虫(Luminousbeetles,它们主要由萤火虫(fireflies),叩头虫(clickbeetles)和欧洲萤(glowworms)3大种类组成)。目前,除发光蘑菇和发光蚯蚓的发光机理尚不清楚外,其余生物的发光机理已研究得较为透彻,并使细菌荧光素酶(BacterialLuciferase简称BL)和萤火虫荧光素酶(FireflyLuciferase简称FL)形成商品酶用于分析检测。
应用
荧光素酶报告系统也可以作为细菌荧光素酶报告系统的一个替代,特别是对监测环境应激具有重要意义.由于应用荧光素酶的成本低、应用范围广,所以被广泛应用于检测某些特殊细菌、厌氧微生物,监控生长缓慢的微生物,用于食品、饮料、自来水、化妆品、药物检测,河流水质、大气环境的监测。
制备
作为FL生产原料的萤火虫,要依靠人工捕捉或养殖,受地域和季节性限制,且该生物生产周期长、养殖成本高、提取的酶成分复杂,随着分子生物学的发展,人们转向用基因工程的方法进行生产。1985年,deWet,J.R.等首次克隆了P.Pyralis的FL基因,并在大肠杆菌(Escherichiacoli)中表达,从中得到具有活性的FL。1986 年,他们测定了FL基因的cDNA序列。随后,各种发光甲虫的FL基因相继克隆成功,并能在原核和真核表达系统中表达。取自P.Pyralis长约1.8kb的cDNA基因在E.coli表达的产物是分子量为62kD,含550个氨基酸的多肽链,与自然提取得到的FL相比,具有同样的反应动力学特性和发射波长,在相同的反应条件下酶的稳定性亦无差异。萤火虫荧光素酶基因通过克隆在E.coli表达,转化体在37℃、LB培养基中生长到对数后期收集菌体,用渗透压法、冻融法提取细菌胞质组分,经均质、离心,用凝胶排阻、离子交换色谱提取纯酶,冷冻干燥保存。BL可从培养发光细菌直接提取得到,其制备方法与FL类似。从V.harveyi中提取的酶活可达1.8×1011LU/mg,为获得特殊用途的BL,亦可通过诱变或基因克隆得到。各种发光细菌的基因克隆均有许多报道。
生物活性
Luciferase, firefly 是一种发光酶,负责萤火虫和磕头虫的生物发光。
体外研究

Firefly luciferase is the light-emitting enzyme responsible for the bioluminescence of fireflies and click beetles. The enzyme catalyses the oxidation of firefly luciferin, requiring oxygen and ATP. Because of the requirement of ATP, firefly luciferases have been used extensively in biotechnology.


理化性质

闪点 
111℃
储存条件 
−70°C

形态
powder

颜色
white

安全数据

危险品标志 
Xi,Xn,T
危险类别码 
36/37/38-22-52/53-45
安全说明 
26-36/37-24/25-23-22-61-45-53
WGK Germany 
3


3-10-21
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