"HEK293T/17 Cell|人胚肾细胞
细胞背景资料:胚肾;5型腺病毒及SV40转化;女性
细胞形态:上皮细胞样
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够GAO,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
细胞生长:贴壁
HEK293-F细胞类似产品::P3-X63Ag8.653细胞、SKG3A细胞、B4G12细胞
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RCC10细胞类似产品::LAPC4细胞、SCC25细胞、H-1651细胞
BDCM细胞类似产品::OCI/AML2细胞、KPL-4细胞、NHEK细胞
rHSC-99细胞类似产品::WEHI 3细胞、A 72细胞、RPMI-2650细胞
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
HEK293T/17 Cell|人胚肾细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题,客户遇到的问题从细胞生长角度来说,针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因,我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因:细胞本身的状态》1)细胞传代次数多,细胞老化;2)细胞的接种量:接种量过低,细胞生长缓慢;3)细胞传代时间过晚:细胞中毒,影响传代后的细胞生长;4)胰酶消化时间过长或过短:时间过长,细胞死亡;时间过短,细胞未完全分离而成团,细胞死亡;5)细胞的冻存与复苏:慢冻速融。污染:1)支原体污染;2)霉菌污染;培养基或血清:1)更换血清或培养基之前未进行验证;2)选择的培养基是否合适;3)培养基配制是否准确无误;培养环境:1)CO2供应是否正常;2)培养箱或摇床温度控制是否正确;解决方法:根据以上四个方面的可能原因,做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态:如传代次数、接种量等;2)避免产生污染(用正规、合法、可溯源的血清);3)要用合适的血清或培养基,ZuiHAO经过验证;4)注意实验室的环境;二、培养细胞死亡》可能原因:1)培养箱内无CO2;2)培养箱内温度波动太大;3)细胞冻存或复苏过程中损伤;4)培养液渗透压不正确;5)培养液中有毒代谢产物堆积;解决方法:1)检测培养箱内CO2;2)检查培养箱内温度;3)取新的保存细胞种;4)检测培养液渗透压;5)换入新鲜培养液。
NHA细胞类似产品::MPP-89细胞、CNE细胞、NIE 115细胞
WEHI 3B细胞类似产品::Tca-8113细胞、4T1.2细胞、Nb2-11细胞
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3T3-L1细胞类似产品::NS1-Ag 4/1细胞、LTEP-a2细胞、CCD1112Sk细胞
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
细胞传代比例:对于有限细胞系,传代时以二、四、八或十六倍(传代比率分别是2、4、8和16)降低细胞密度,计算群体倍增数更容易(即分别是传代比率2对应1次倍增,4对应2次倍增,8对应3次倍增,16对应4次倍增);例如,一传八的培养物需要3次倍增才能达到原来相同的细胞密度。脆弱的或生长缓慢的细胞系通常一传二,而有活力的,生长快速的细胞系可以一传八,甚至一传十六。有些连续细胞系可一传五十或一传100。一旦细胞系变为连续细胞系(通常经过150次或200次倍增以上),细胞浓度是主要参数,培养浓度应降至10(4)/ml--10(5)/ml之间。可选择传代间隔合适的传代比率或稀释度,或许为1周或2周,同时要保证:细胞密度不可稀释过低,使其延迟期合理(在24小时以内),可重新进入生长周期;而且在下次传代前不进人平台期。
NCI-322细胞类似产品::H-2171细胞、H226细胞、NCI-H460细胞
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