人胚肾细胞-绿色荧光蛋白标记;HEK293T-COGFP-PURO 新品

产品信息：

1. 细胞基本档案

特征维度  详细信息

亲本来源  人胚肾细胞 (HEK-293T)

标记基因  绿色荧光蛋白 (GFP)

筛选抗性  嘌呤霉素 (Puromycin)

生长特性  贴壁生长 (但贴壁非常弱)

细胞形态  上皮细胞样 (多角形)

核心能力  高转染效率、病毒包装、荧光示踪

生物安全等级  BSL-2

核心特性与应用

自带荧光 (GFP)： 细胞在普通荧光显微镜下呈现明亮的绿色。你可以用它作为阳性对照，或者用于活体动物成像实验，追踪细胞在体内的分布和存活情况。

病毒包装神器： 293T 细胞含有 SV40 大 T 抗原，能让带有 SV40 复制起点的质粒高效复制，从而产生极高滴度的病毒。带上 GFP 标记后，你可以直观地通过荧光强弱判断病毒包装是否成功。

双重筛选： 既可以通过 GFP 观察，也可以通过 Puromycin 筛选，保证了细胞群体的稳定性。

3. 培养操作手册

基础培养条件

基础培养基： 高糖 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)。

血清： 10% 胎牛血清 (FBS)。

添加剂： 1% 青霉素-链霉素 (双抗)。

特殊添加 (关键)： 为了维持 GFP 的稳定高表达，建议在培养基中添加 嘌呤霉素 (Puromycin)。

推荐浓度： 通常为 1.0 μg/mL (部分说明书建议 0.5-2 μg/mL)。如果不加压，长期传代可能导致荧光信号减弱。

环境： 37℃，5% CO，饱和湿度培养箱。

传代操作 (关键步骤)

注意：293T 细胞贴壁非常弱，像“浮萍”一样，一晃就掉。操作必须轻柔！

观察： 细胞密度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗： 弃去旧培养基，用不含钙镁的 PBS 轻柔润洗一次（动作要轻，防止把细胞冲下来）。

消化： 加入适量的 0.25% 胰蛋白酶 (Trypsin-EDTA)，放入培养箱消化 30秒 - 1分钟。

注意： 时间很短！ 显微镜下观察到细胞间隙变大、稍微变圆即可。千万不要消化太久，否则细胞会成片脱落成团，很难吹散。

终止： 迅速加入含血清的完全培养基终止消化。

吹打： 轻柔吹打使细胞分散成单细胞悬液（不要用力过猛，否则细胞膜容易破）。

离心： 1000 rpm 离心 3-5 分钟，弃上清。

重悬： 加入新鲜完全培养基（含 Puromycin），按 1:2 至 1:3 的比例传代。

收货处理

常温运输（T25瓶）：

收到后用 75% 酒精消毒瓶壁，放入培养箱静置 2-4小时。

重点： 293T 细胞运输途中极易脱落。如果镜下发现瓶底有大量漂浮的细胞团，不要扔！ 将培养基转移到离心管，离心（1000rpm, 5min）收集细胞，弃上清，用 PBS 重悬沉淀后，重新接种到原瓶或新瓶中继续培养。

干冰运输（冻存管）：

37℃水浴快速复苏，离心重悬后接种。

4. 特别注意事项

轻拿轻放： 换液、传代时，动作一定要轻柔。加液时要贴着瓶壁缓缓加入，不要直接冲着细胞层倒下去，否则细胞会大片脱落。

防聚团： 消化时间过长或吹打力度不够都会导致细胞聚团。如果传代后细胞抱团生长，只要不是特别大，通常不影响实验，但会影响铺板的均匀度。

荧光观察： GFP 荧光虽然稳定，但长时间暴露在强激发光下会淬灭，观察完后请尽快将细胞放回培养箱。

支原体检测： 建议定期检测支原体，确保实验环境的纯净。

公司正在出售的产品：

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CRLF1 英文名称： 细胞因子受体样因子1抗体 0.1ml	Anti-IL-2R gamma/CD132 白介素2受体γ链抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml
Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg	Rhesus antibody Rh TPD52/Prostate and colon associated protein 癌和相关蛋白 规格 0.2ml
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不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。

功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。

生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。