pCMV-C-Flag
pCMV-C-Flag是信裕生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码Flag标签的序列,因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-Flag质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
multiple cloning site
680-740
T7 promoter and T7 primer binding site
817-838
SV40 polyA signal
850-1233
f1 origin of ss-DNA replication
1371-1675
neomycin/kanamycin resistance ORF
2217-3008
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3009-3467
pCMV-C-Flag质粒的图谱如下:
pCMV-C-Flag的多克隆位点的详细图谱如下:
651
GAGCTCCACC
GCGGTGGCGG
CCGCTCTAGC
CCGGGCGGAT
CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG
CGCCACCGCC
GGCGAGATCG
GGCCCGCCTA
GGTTCGAAGA
EcoRI EcoRV SacI BglII XhoI XbaI
701
GCAGGAATTC
GATATCGTCG
ACAGATCTCT
CGAGTCTAGA
CGTCCTTAAG
CTATAGCAGC
TGTCTAGAGA
GCTCAGATCT
751
ATGACGACGA
CCCGGTACCT
TAATTAATTA
AGGTACCAGG
TACTGCTGCT
GGGCCATGGA
ATTAATTAAT
TCCATGGTCC
pCMV-C-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-Flag)包括:
Afl II
Age I
Ahd I
Asc I
Bbs I
Bbv II
Blp I
Bsg I
BsiW I
BsmB I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstE II
Ear I
Eco47 III
Eco72 I
EcoN I
Esp I
Fse I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
Psp1406 I
Sap I
pCMV-C-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-Flag once)包括:
Nde I
CA`TA,TG
241
Pvu I
CG,AT`CG
851
SnaB I
TAC|GTA
347
Bcl I
T`GATC,A
1005
Nhe I
G`CTAG,C
598
Mun I
C`AATT,G
1098
Sac I
G,AGCT`C
656
Hpa I
GTT|AAC
1111
Sac II
CC,GC`GG
663
Mlu I
A`CGCG,T
1234
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
664
Dra III
CAC,NNN`GTG
1464
Not I
GC`GGCC,GC
669
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
2121
PspA I
C`CCGG,G
681
BseR I
GAGGAG 16/14
2164
Xma I
C`CCGG,G
681
Stu I
AGG|CCT
2167
Srf I
GCCC|GGGC
683
Cla I
AT`CG,AT
2186
Sma I
CCC|GGG
683
Kas I
G`GCGC,C
2345
BamH I
G`GATC,C
688
Nar I
GG`CG,CC
2346
HinD III
A`AGCT,T
694
Ehe I
GGC|GCC
2347
Pst I
C,TGCA`G
704
Bbe I
G,GCGC`C
2349
EcoR I
G`AATT,C
706
Msc I
TGG|CCA
2428
EcoR V
GAT|ATC
714
Tth111 I
GACN`N,NGTC
2464
Sal I
G`TCGA,C
718
BsrD I
GCAATG, 8
2579
Acc I
GT`MK,AC
719
Bsp1286 I
G,DGCH`C
2649
Bgl II
A`GATC,T
724
Rsr II
CG`GWC,CG
2862
PaeR7 I
C`TCGA,G
730
BsiC I
TT`CG,AA
3028
Xho I
C`TCGA,G
730
BstB I
TT`CG,AA
3028
Xba I
T`CTAG,A
736
Bsa I
GGTCTC 7/11
3335
Bsp120 I
G`GGCC,C
769
HgiE II
ACCNNNNNNGGT-1/13
3675
Apa I
G,GGCC`C
773
ApaL I
G`TGCA,C
3950
pCMV-C-Flag质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(817-838): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-C-Flag的全序列信息: D2632 pCMV-C-Flag-seq.txt
包装清单:
KL-2632-1μg
pCMV-C-Flag
1μg
KL-2632-100μg
pCMV-C-Flag
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。