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产品简介

PCMV-C-FLAG 为真核表达质粒载体；CMV 强启动子驱动目的基因表达，C 端携带 FLAG 标签序列，可用于哺乳动物细胞内目的蛋白过表达，通过 FLAG 标签开展 WB、免疫共沉淀、免疫荧光等检测实验。仅用于体外科研，不可用于临床、基因治疗、人体实验。

技术参数

1. 启动子：CMV 立即早期启动子

2. 标签：C‑末端 FLAG 标签（DYKDDDDK）

3. 复制原点：pUC ori（大肠杆菌扩增）

4. 原核抗性：氨苄青霉素抗性（Amp⁺）

5. 真核筛选标记：无（载体基础骨架）

6. 载体形式：冻干质粒 DNA / 质粒溶液

7. 测序通用引物：CMV‑Forward，BGH‑Reverse

储存条件

- 干粉质粒：‑20℃密封避光干燥保存，有效期 24 个月

- 质粒水溶液：‑20℃分装保存，避免反复冻融；4℃短期不超过 14 天

使用说明

1. 质粒扩增：转化 DH5α 等大肠杆菌感受态，LB‑Amp 抗性平板，37℃培养；液体摇菌选用含氨苄的 LB 培养基。

2. 目的基因克隆：将目的基因去除终止密码子，插入多克隆位点，实现蛋白 C 端融合 FLAG 标签。

3. 细胞转染：质粒纯化后，使用转染试剂转染哺乳动物细胞，CMV 启动子介导靶蛋白表达，C 端带上 FLAG 标签。

4. 检测：使用 FLAG 抗体开展 Western Blot、IP、IF 实验。

使用注意事项

1. 扩增细菌必须加氨苄青霉素筛选，否则质粒容易丢失。

2. 目的基因插入时，阅读框必须匹配，保证 FLAG 标签正常翻译；若保留基因本身终止子，会造成 FLAG 标签不表达。

3. 质粒避免反复冻融，防止 DNA 降解。

4. 仅限实验室体外分子生物学研究，严禁用于体内基因递送、临床。

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