染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,通常用于转录因子结合位点或组蛋白特异性修饰位点的研究。将ChIP与新一代测序技术相结合的ChIP-Seq技术,能够高效地在全基因组范围内检测与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段。
ChIP-Seq首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建,然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。研究人员通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段信息。
应用领域:
• 判断DNA链的某一特定位置组蛋白修饰的类型
• 精确定位RNA polymerase II及其它反式因子在基因组上结合位点
• 组蛋白共价修饰与基因表达的关系的研究
• 转录因子结合位点和功能研究
产品优势:
• 检测覆盖范围广:全基因组范围内扫描目标区域;
• 检测分辨率高:更利于精确定位目标区域;
• 样本需要量低:需要的免疫沉淀后的DNA量可低至5-10ng;
• 可靠性好:避免了非特异性杂交,背景低;
• 性价比高:花费较少即可检测全基因组,获取准确丰富的信息。
技术路线:
分析内容:
1.基本信息分析
按照标准过滤原则对将raw data过滤成clean data;
raw data及clean data的数据量及Q20、Q30统计;
raw data及clean data测序质量分布图,GC/AT含量分布图,duplicate rate统计。
2.标准信息分析
比对到参考基因组并统计比对结果(需提供参考基因组信息);
Peak calling得出Peak region report(CSC bedformat file);
去除multiple identical序列;
确定转录结合位点和组蛋白标记;
Peak相关基因的GO注释分析;
多个样本间peak及相关基因的差异分析。
3.高级信息分析
根据客户的具体研究目的所开展的深入分析。
样品要求:
1. 样品类型:ChIP-DNA;
2. 样品浓度:≥10 ng/µl;
3. 样品总量:≥100 ng;单次实验用量为30ng时实验的可重复性较好,因此请尽可能提供较多的样品;若单次ChIP后DNA量不够,建议将2~3次ChIP的DNA合并在一起;
4. 样品纯度:OD260/280为1.8~2.2;
5.DNA片段大小:分布在100~500bp范围,且主要片段在~250bp(清晰的电泳图或2100检测结果)。