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真菌基因组DNA提取试剂盒

询价 50T 起订
100T 起订
湖北 更新日期:2024-10-21

康迪斯化工(湖北)有限公司

VIP5年
联系人:刘焕
手机:18064039730 拨打
邮箱:3127859172@qq.com

产品详情:

中文名称:
真菌基因组DNA提取试剂盒
保存条件:
常温储存
纯度规格:
99%
产品类别:
试剂
含量:
99%
包装:
50T | 100T
外观:
液体

Size:50T | 100T

存储:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期 12 个月,2℃-8℃保存时间更长。

 

产品简介

真菌是具有真核和细胞壁的异养生物,种属很多,已报道的属达 1 万以上,种超过 10 万个。真菌通常又分为三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA,可以直接用于PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游应用实验。

 

产品组分

Componets

50T

100T

RNase A

1mL

1mL×2

蛋白酶K

1mL

1mL×2

玻璃珠

6g

11g

溶液A

10mL

10mL

溶液B

20mL

20mL

漂洗液

15mL

15mL×2

洗脱液

10mL

20mL

吸附柱

50个

50个

收集管

100个

100个

 

操作步骤:

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

 

1、样品的处理:

1)对于酵母菌,取 1-2ml 培养好的菌液,离心收集,弃上清。加入 200ul 溶液 A,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 5-10min。

2)霉菌(孢子也可相同处理):取 50-100mg 菌丝,加 200ul 溶液 A,用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝,加入20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 30min。

3)大型真菌(如蘑菇等):称取 50-100mg 样品,倒入适量的液氮,立即研磨重复 3 次,使样品研成粉末(如无液氮,可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器适当研磨),加 200ul 溶液 A,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 5min。

 

2、加入 20ul 的蛋白酶 K(10mg/ml),充分混匀,55℃水浴消化 30min,消化期间可颠倒离心管混匀数次。12000rpm离心 2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。

 

3、在上清中加入 200ul 溶液 B,充分混匀。如出现白色沉淀,可放 55℃水浴 5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的 DNA 量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

 

4、再加入 200ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置 2 分钟。

 

5、12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

 

6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

 

7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

 

8、12000rpm 离心 2min,将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

 

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置 5min,12000rpm 离心 1min。

 

10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置 2min,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的基因组 DNA。

 

注意事项:

1. 由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶 K 处理,一般都可以得到一定量的基因组 DNA,如电泳检测很弱,一般 PCR 都会有较好结果。

 

2. 若溶液 A 或溶液 B 中有沉淀,可在 55℃水浴中重新溶解。

 

3. 如果 DNA 提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取 DNA 成弥散短条带,可减少玻璃珠处理时间。

 

4. 洗脱缓冲液的体积不少于 50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围),pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。

 

5. DNA 浓度及纯度检测:得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖

 

凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA、40 μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 

6. 在确保样品无误的情况下,如经过多次试验,都无法提出 DNA,请将部分样品寄至我公司,我们代为摸索优

化条件,以使您的实验能够正常进行下去。

 

 

 

我们所提供的产品仅供科研使用,不得用于临床诊断、治疗、食品或者化妆品等用途!在您向我们订购产品之时,表明您已经知晓我们的产品仅做科研用途,并遵守法律法规!

真菌基因组DNA提取试剂盒

公司简介

康迪斯化工(湖北)有限公司是一家立足于生命科学领域有自主知识产权的高新技术企业,主要从事生物试剂的研发与生产,并以持续探索和开发生命科学技术为动力,致力于为科研工作者提供实用、高效的科研试剂,为生命科学的研究与发展提供有意义的帮助。

成立日期 (6年)
注册资本 200万
员工人数 10-50人
年营业额 ¥ 1000万-5000万
经营模式 贸易,工厂,试剂
主营行业 无机化工,中间体,生物化工,有机原料,化学试剂

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