SYBR Green I

SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳以及毛细管电泳等。

SYBR Green I 与双链 DNA 的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等）没有抑制作用。另外，SYBR Green I 与 EB相比，诱变能力大大降低。

使用方法：

注意：染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。

SYBR Green I  后染方法 （推荐方法）

1. 制作不含染料的凝胶，按照常规方法进行电泳。

2. 用 pH 7.0 - 8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照 10000：1 的比例稀释 SYBR GreenⅠ浓缩液（如 50ml 1×TAE 中加入 5μl 染料），混匀，制成染色溶液。

注：如要染色 RNA ，按照 5000 ：1  比例稀释。

3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔盖住容器使染料避光。室温振荡染色 10-30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

4. 紫外灯下观测。

SYBR Green I  预染方法

1. 6×SYBR loading buffer 预染液的配制：

6×SYBR loading buffer 预染液避光 2-8℃可以放置一个月以上。

2. 制胶：按常规方法制备凝胶，凝胶温度降至 60℃左右时加入 10000×SYBR，使染料终浓度为 1×，如 40ml 凝胶溶液中加入 4μl 染料。

注：如要染色 RNA ，使染料终浓度为 2 ×（如 40ml  凝胶溶液中加入 8μl  染料）。

3. 样品预染：取 1-2μl 6×SYBR loading buffer 预染液与电泳样品和 Marker 混合，室温预染3-5 分钟。

4. 上样、电泳后紫外灯下观察。

使用注意事项

1．后染方法是推荐方法，能得到更好的电泳结果；由于 SYBR 对样品过量非常敏感，预染方法容易出现条带扭曲变形（建议泳道中每条带的含量不要超过 5ng），请根据实际情况摸索出适合自己的实验程序，

2. SRBR 对电泳缓冲液的 pH 要求严格，有效 pH 为 7.5-8.0，电泳时尽量使用新鲜配制的缓冲液，并保证合适的 pH 范围。

3. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

4. 使用酒精沉淀核酸中，SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。

5. 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blot，建议在预杂交和杂交溶液中加入0.1%- 0.3% 的 SDS，可以有效去除 SYBR。

6. 在紫外下观察，与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA 则颜色为橘黄。