反转录酶

Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H^-）

M-MLV反转录酶(RNase缺失)

●    产品货号及规格：

● 产品简介：

M-MLV反转录酶(RNase H^-)，是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比，缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性，不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，可以合成长片段从DNA。

本产品中M-MLV反转录酶(RNase H^-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。

特点：M-MLV反转录酶(RNase H^-)可以合成长达9-13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H^-)在37℃反应时的一些不足。

用途：M-MLV反转录酶(RNase H^-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA条链的合成。合成的cDNA条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。

来源：该反转录酶(RNase H^-)由大肠杆菌表达

活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at37℃. Enzyme activity is assayed in50 mMTris-HCl (pH 8.3),6 mMMgCl₂,10 mMDTT,40 mMKCl,0.5 mMdTTP, 0.4 MBq/ml [³H]-dTTP0.4 mMpolyA•oligo(dT)_12-18.

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA条链等的需要。

酶储存溶液：50 mMTris, pH 8.3,100mMNaCl,1 mMEDTA,5 mMDTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。

5×RT buffer：250 mMTris, pH 8.3 at25℃,250 mMKCl,20 mMMgCl₂,50 mMDTT。

失活或抑制：70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H^-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(RNase H^-)有抑制作用。

● 使用说明：

cDNA链合成：

1. 0.2ml PCR管中配制模板/引物变性混合液：

注：* Total RNA 的使用量一般为1 ng-1 μg；mRNA的使用量一般为 10 pg-1 μg。

2.70℃保温 10 分钟后迅速在冰上急冷 2 分钟以上。

注：此步骤是打开RNA的一些比较稳定的二级结构。

3. 离心数秒钟使模板 RNA/引物的变性混合液聚集于离心管底部。

4. 在上述离心管中配制下列反转录反应液。