One-Step RT-PCR Kit-abs60073

本制品是通过基因重组技术克隆表达M-MuLV的缺失突变型RNase H-的反转录酶。一般的野生型M-MuLV（Moloney Murine Leukemia Virus）具有以下几种活性：依赖于RNA的DNA聚合酶活性；依赖于DNA的DNA聚合酶活性；RNase H活性。由于RNaseH能够催化降解 DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶的RNase H活性缺失，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成，高比例的全长cDNA文库的构建以及Real Time RT-PCR反应等。
产品组分：

实验方法：
cDNA 第一链合成反应体系：
试剂融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
1) 按顺序加入以下反应物

2)  如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65°C 孵育5分钟，冰上冷却，再加入其它组分。

3)  轻轻混匀，离心。42°C 孵育15-30分钟。如果RNA模板中不含poly A结构，25°C 先孵育5分钟，随后42°C 孵育15-30分钟。反应产物可直接用于 PCR，如果不立即使用， -20°C 保存少于一周，长时间保存建议-70°C放置。

注：有实验结果提示，本反转录酶可在 15 分钟内完成 1kb 反转录反应。

第一链 cDNA 的 PCR 扩增：

        合成的第一链cDNA可直接用于PCR。

常用反应体系（50μl）

*Mg2+终浓度为 2mM

常用 PCR 循环：

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一目的条带，PCR 方法检测无大肠杆菌 DNA 残留，无核酸内、外切酶污染，无 RNA 酶污染。

活性定义：以Poly(rA)•Oligo（dT）为模板/引物，在37℃、10分钟条件下， 掺入1 nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位。