反转录酶

产品简介

反转录酶来源于莫洛尼鼠白血病病毒（M‑MLV），经基因工程重组表达纯化；依赖 RNA 模板合成 cDNA 第一链。用于 mRNA、总 RNA 反转录合成 cDNA，RT‑PCR、qRT‑PCR、cDNA 文库构建等分子实验。仅供体外科研，不能用于人体临床。

技术参数

1. 来源：重组表达 M‑MLV 反转录酶

2. 活性：200 U/μL

3. 性状：含甘油的酶储存液

4. 热稳定性：最适反应温度 37‑42℃

5. RNase H 活性：低 RNase H 活性版本，减少模板 RNA 降解

6. 配套组分（常规套装）：5× 反转录缓冲液，DTT，dNTP 混合液

储存条件

- 酶原液：‑20℃保存，严禁反复冻融；有效期 12 个月

- 缓冲液、dNTP：‑20℃避光保存；dNTP 避免反复冻融

- 工作体系配制置于冰上操作

操作方法

1. RNA 模板、引物、dNTP 混合，65℃孵育 5 min，快速冰浴冷却，打开 RNA 二级结构。

2. 在冰上配制反应体系，加入 5× 反转录缓冲液，DTT，反转录酶，无 RNase 水补足体积。

3. 42℃孵育 30‑60 min 进行 cDNA 合成。

4. 70℃ 15 min 热失活终止酶反应。

5. 合成得到 cDNA 可直接用于 PCR 或‑20℃分装保存。

使用注意事项

1. 全程严格防 RNase 污染，耗材使用无 RNase 等级。

2. 酶对温度敏感，取出立即放冰上，不要室温久放。

3. RNA 模板降解会直接导致反转录产物产量下降。

4. 反应温度不要超过 45℃，过高会造成酶快速失活。

5. 不要反复冻融酶制剂，分装使用更佳。

6. 仅用于体外分子实验。

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操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定