NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)

细胞名称：NR8383    大鼠肺泡巨噬细胞

组织来源：肺；巨噬细胞；肺泡

培养条件：F-12K +20% FBS

形       态：贴壁和悬浮混合；巨噬细胞

背       景：NR8383来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TGF beta前体。在博莱霉素刺激下，TGF beta mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生达50%。 即使达到0.001mg/mL的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。 NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性。

NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。

formazan结晶的生成量仅与活NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。

1.接种：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个接种到96孔板，每孔体积200ul.

2.NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)培养：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

3.呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。

4.比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)生长曲线。