RNA-pulldown-Kit

技术原理

RNA-pulldown是一种在体外研究RNA与蛋白相互作用的分子生物学技术，用于鉴定与特定RNA分子结合的RNA结合蛋白。RNA结合蛋白（RNA-binding proteins, RBPs）通过识别RNA的特定序列或结构基序，参与RNA剪接、转运、翻译调控、稳定性维持等多种转录后调控过程。RNA-pulldown实验需要合成与目标RNA序列一致、具有生物素标记的RNA探针。实验中，探针作为“诱饵”与全细胞裂解液共孵育，RBPs将识别并结合到探针上，通过链霉亲和素标记的磁珠分选、富集并洗脱RNA结合蛋白，实验产物可用于Western Blot或蛋白质质谱实验检测。

技术应用

（1）结合质谱分析，鉴定与目标RNA结合的RNA结合蛋白质，常用于寻找mRNA的翻译调控的RBPs；<br>

（2）结合Western-Blot，针对候选的RBP，验证其与目标RNA的结合能力。<br>

（3）用于比较不同RNA突变体或截短片段的与RBP蛋白结合差异，精确定位蛋白识别的RBP的RNA结合域。<br>

技术特点

（1）<b>与RIP技术相比：</b>RNA-pulldown实验是体外实验，可以使用人工合成的RNA探针、RNA突变体或截短片段探针，灵活性高，适合精确定位结合域和验证直接互作。<br>

（2）<b>与CLIP-Seq技术相比：</b>CLIP在活细胞内通过交联固定RNA-蛋白直接接触位点，提供RNA-蛋白互作的体内证据和结合位点信息，常用于发现目的蛋白结合的RNA。<br>

产品优势

（1）背景蛋白：优化的磁珠封闭组合，无非特异性蛋白质焦虑。<br>

（2）捕获效率高：试剂盒高效RI，避免RNA探针降解，捕获效率完全释放。<br>

（3）试剂齐全：洗脱产物可用于Western-Blot验证、MS质谱检测。<br>

（4）实验周期短：实验全程＜4h。