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RNA Pull-down试剂盒

RNA Pull-down Kit
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上海 更新日期：2024-09-28

上海复名医疗科技有限公司

非会员
联系人：朱小鸥
电话：13817407320拨打
手机：13817407320 拨打
邮箱：13817407320@163.com

产品详情:

中文名称：
RNA Pull-down试剂盒
英文名称：
RNA Pull-down Kit
品牌：
Engibody
产地：
美国
产品类别：
RNA和蛋白互作研究产品

品名：Smart-RNA-Pull™ RNA Pull-down Kit，货号：IF9608，品牌：Engibody

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)



NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校课题组青睐并长期采购的RNA Pull-down试剂盒！

RNA-结合蛋白体外Pull-down实验试剂盒


Smart-RNA-Pull™
RNA Pull-down试剂盒的4大优势
1、本试剂盒适用于贴壁细胞、悬浮细胞、动物组织、植物组织及纯化后的重组蛋白，适用于末端生物素标记的各种长度和复杂性的RNA探针。适用内源性、过表达或体外翻译的蛋白作为样本类型。
 
2、本试剂盒使用生物素标记RNA探针直接捕获目的蛋白。pull-down时不需要抗体，也不需要离心。完成RNA标记反应后仅需极少的手动操作时间（小于3小时）。
 
3、本试剂盒适用于RBP与mRNA、RBP与LncRNA、RBP与miRNA、RBP与circRNA相互作用，下游衔接已知蛋白的Western blot验证检测和未知蛋白的质谱鉴定。
 
4、本说明书是一本RNA Pull-down实验的全面技术手册，汇总了RNA与各种蛋白互作的详细信息。看完这本保姆级说明书，所有疑难都会迎刃而解，RNA Pull-down尽在掌握之中。

RNA Pull-down


第一部分：背景简介及应用场景
RNA与蛋白质相互作用分析
95%的人类基因组实际上并不编码蛋白质，而是产生大量非编码RNA（ncRNA），这些RNA在生命的生长和发育中发挥着重要的调节作用，与艾滋病病毒/艾滋病、白血病、糖尿病等各种疾病密切相关，并参与干细胞发育和表观遗传学的调节。RNA-蛋白质复合物驱动几乎所有细胞过程中基因表达的转录后调节，包括剪接、核输出、mRNA稳定性和蛋白质翻译。因此，对转录后调控网络和机制的理解取决于确定这些过程中RNA结合的变化。
 
RNA结合蛋白通过与单链RNA结合基序（RBM）结合来控制细胞生物学的许多方面。然而，RBM可以隐藏在其局部RNA结构中，从而抑制RNA与蛋白质的相互作用。
 
RNA与蛋白质相互作用的研究越来越受到科学家的关注，成为表观遗传学研究的热点。
 
目前RNA研究的国自然热点主要是mRNA、LncRNA、miRNA、circRNA四大类。

磁珠法RNA-蛋白Pull-down捕获试剂盒为研究人员提供了一种简化、高效的方法，使用末端生物素标记的RNA作为诱饵来富集与RNA互作的蛋白。
 
适用于RBP与mRNA、RBP与LncRNA、RBP与miRNA、RBP与circRNA相互作用。
 
下游衔接已知蛋白的Western blot验证检测和未知蛋白的质谱鉴定。
 
 
1、RNA Pull-down和RIP、RNA-EMSA、CLIP，这四种研究RNA-蛋白互作技术的内在区别是什么？
1)、RNA Pull-down———In Vitro体外通过RNA探针捕获目的蛋白或其他候选蛋白，获取蛋白后进行WB检测或MS质谱鉴定。也是经典方法。
 
2)、RNA-EMSA———RNA电泳凝胶迁移阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay)，In Vitro体外通过RNA探针检测目的蛋白，反向验证了RIP。是经典方法。
 
3)、RIP———RNA蛋白免疫沉淀技术是一种用于在细胞天然背景下In Vivo体内探测蛋白质-RNA 相互作用的技术。这种方法可以用于检测特定RBP蛋白与RNA的结合水平。
 
4)、CLIP———这是近年来的新兴技术，紫外交联RNA-RBP免疫沉淀技术，可以分为HITS-CLIP(CLIP-Seq)、PAR-CLIP、iCLIP、miCLIP。
 
2、RNA Pull-down和RIP的联合分析，相互验证
这是经典研究策略，RIP是体内In Vivo研究RNA和蛋白互作，RNA Pull-down是体外In Vitro捕获与RNA互作的已知蛋白或未知蛋白，互相印证。


第二部分：技术原理和技术流程

技术原理：
当固定在链霉亲和素磁珠上的RNA探针与蛋白样本混合孵育时，样本中可以与RNA探针结合的蛋白被探针捕获，并与探针形成蛋白-探针复合物，经过洗涤和洗脱得到目的蛋白，对于未知蛋白可以通过质谱来鉴定，对于已知蛋白可以通过WB实验来验证。 
RNA Pull-down


第四部分：RNA Pull-down结果展示

最经典的RNA和RBP互作的结果如下所示：

每个靶标蛋白的RNA探针均需要设计2个，例如RNA结合蛋白HuR可以和Androgen receptor 3´-UTR RNA结合，因此每组探针均包含2个，如下所示：

  • 生物素标记野生型AR 3´-UTR RNA探针

5´-CUGGGCUUUUUUUUUCUCUUUCUCUCCUUUCUUUUUCUUCUUCCCUCCCUA-3´
250pmol (in 25μL)

  • 多聚A阴性对照探针

poly(A)25 RNA, 250pmol (in 25μL)
 
 RNA Pull-down
RNA Pull-Down and WB assay of the HuR example
 

 
第五部分：RNA Pull-down试剂盒组分清单
（共计16个组分，均可单独购买）
 

编号组分名称数量保存注意
下列组分收到后需储存在 4 °C中。
IF9304核酸友好型Streptavidin Magnetic Beads
备注：此Streptavidin磁珠表面已预先包被核酸oligo，可以最大程度降低对探针的非特异性结合		1 mL+4 °C磁珠不要冷冻，不要干燥，
不要高速离心
R-pull-0021×RNA探针-磁珠结合反应液10 mL+4 °C
R-pull-003磁珠洗涤液5 mL+4 °C
R-pull-00410×RNA探针-蛋白捕获反应液1 mL+4 °C
R-pull-005R-pull专用1×洗涤液10 mL+4 °C
R-pull-006R-pull专用洗脱液（变性）1.5 mL+4 °C
R-pull-007R-pull专用洗脱液（非变性，A液）4 mL+4 °C
R-pull-008R-pull专用洗脱液（非变性，B液）0.5 mL+4 °C
IF9217快速灵敏蛋白染胶液（兼容质谱）50 mL室温
下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中
R-pull-010DNase I套装（含有10×Buffer）100 U-20 °C用于细胞裂解物中DNA的去除
R-pull-011RNase抑制剂50 μL-20 °C
R-pull-012tRNA (10 mg/mL)50 μL-20 °C
R-pull-01350% Glycerol500 μL-20 °C
R-pull-014R-pull专用Loading Buffer（5×）1 mL-20 °C用于SDS-PAGE
AT0098山羊抗小鼠二抗 Conjugated HRP100 µL-20 °C用于下游WB检测
AT0097山羊抗兔二抗 Conjugated HRP100 µL-20 °C用于下游WB检测

 


订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)

RNA;RBP;RNA Binding Protein;RNA Pull-down Kit;HuR;

公司简介

复名表观遗传学（上海复名医疗科技有限公司），专注于表观遗传学研究工具的开发和表观技术服务的提供。 经过多年和全球著名大学表观研究领域专家教授的交流和探讨，积累经验，精准解决表观研究工具领域的痛点难点，在表观基因组学、表观转录组学和表观蛋白组学领域均开发了一系列研究试剂盒并提供表观技术服务，和哈佛大学，华盛顿大学，斯坦福大学，麻省理工学院，UCSC，UCSF，HHMI，德国海德堡大学，法国国家健康与医学研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所开发的抗体，试剂，试剂盒受到了全球客户的欢迎。 Engibody为复名表观遗传学旗下品牌，所开发的抗体，试剂，表观试剂盒在全球范围内销售，受到众多世界著名大学课题组老师及医药500强巨头的认可和喜爱。 公司地址: 上海市嘉定区嘉定工业区永盛路1218号金元大厦908室。 订购请咨询：13817407320(微信同号)

成立日期 (6年)
注册资本 200万
员工人数 1-10人
年营业额 ￥ 100万-300万
经营模式 试剂,服务
主营行业 抗体,癌症研究,蛋白组学,分子生物学,细胞生物学

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