产品名称 | 小鼠毛囊干细胞 | 组织来源 | 毛囊组织 |
英文名称 | Mouse Hair Follicle Stem Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3579 |
方法简介 实验室分离的小鼠毛囊干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠毛囊干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠毛囊干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠毛囊干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄ICR小鼠，体重18-24g，每只取材获0.35-0.75×10⁶个细胞，活力>86%
试剂：Dispase、Ⅳ型胶原酶、胰蛋白酶、Hanks液、α-MEM培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入Dispase、Ⅳ型胶原酶、胰蛋白酶、Hanks液37℃消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞密度至3×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
干细胞增殖较慢，接种后3-5天可见小集落形成，7-10天可达到传代密度
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
大鼠卵清蛋白特异性IgE抗体(OVA-sIgE)elisa试剂盒 | BALL-1 (STR)人B淋巴细胞 |
大鼠卵清蛋白(OVA)elisa试剂盒 | 大鼠食管成纤维细胞 |
大鼠Otolin-1蛋白(Otolin-1)elisa试剂盒 | 人小胶质细胞 |
大鼠成骨相关转录因子抗体(OSX-Ab)elisa试剂盒 | 人牙龈上皮细胞 |
大鼠分泌型Klotho 蛋白(s-Klotho)elisa试剂盒 | 人牙周膜成纤维细胞 |
大鼠分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)elisa试剂盒 | 大鼠上皮细胞 |
猪TANK结合激酶1（TBK1）elisa试剂盒 | 大鼠平滑肌细胞 |
SK-MEL-2+LUC人皮肤黑色素瘤荧光素酶标记细胞专用培养基 | FOXA2基因过表达细胞株 |
ProPakA.6人胚肾细胞专用培养基 | SYCP2L基因过表达细胞株 |
兔原代卵巢间质细胞专用培养基 | NCKIPSD基因过表达细胞株 |
猪原代气管上皮细胞专用培养基 | FCRL2基因过表达细胞株 |
人原代髓核细胞永生化细胞专用培养基 | CHST5基因过表达细胞株 |
小鼠毛囊干细胞SH-SY5Y细胞专用培养基 | TRMT1L基因过表达细胞株 |
人原代NK细胞专用培养基 | GPR148基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷PBS液、Ⅰ型胶原酶+Dispase II混合消化液、α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取皮肤组织，冰预冷PBS液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入Ⅰ型胶原酶消化液，37℃水浴消化27min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用Percoll密度梯度离心富集干细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察梭形或多角形，贴壁生长，核质比高，核仁明显及生长情况。
