人气管上皮细胞

人气管上皮细胞

基于组织块贴壁法从健康供体的气管上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：人气管上皮细胞

英文名称： Human Tracheal Epithelial Cells

组织来源： 气管组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人气管上皮细胞采用链霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人气管上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人气管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人气管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

气管黏膜取材：无菌获取气管内壁黏膜组织，低温保湿，避免黏膜干燥坏死。

EDTA-胰酶分步解离：先EDTA松动细胞连接，再低浓度胰酶短时消化，分离气管上皮细胞。

过滤纯化单细胞：滤网过滤去除组织残渣，离心收集纯净上皮细胞悬液。

无血清特异性培养：采用气管上皮专用无血清培养基，避免血清诱导细胞分化。

低频轻柔换液：每3天换液一次，操作轻柔，防止冲刷脱落表层上皮细胞。

低密传代养护：细胞融合75%即可传代，低浓度胰酶温和消化，减少细胞损伤。

纤毛形态观察：成熟细胞观察纤毛生长状态，排列规整、活性正常即可用于气道实验。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。