乳酸脱氢酶(LDH)测试盒

乳酸脱氢酶(LDH)测试盒

产品介绍：

LDH（EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。

测定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

核心反应原理：可逆氧化还原分光检测：LDH 催化乳酸和 NAD⁺反应生成丙酮酸与 NADH；正向生成 NADH 用于信号检测。

靶标反应路径：乳酸 + NAD⁺\(\xrightarrow{LDH}\)丙酮酸 + NADH + H⁺。

吸光信号来源：生成的 NADH 在 340 nm 紫外产生吸收；吸光度上升速率与 LDH 活力成正比。

定量计算原理：测定每分钟 A340 增加值，由 NADH 摩尔消光系数计算酶活力单位。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到620nm和510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

直链淀粉标准曲线：将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线

支链淀粉标准曲线：将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线样本测定：取0.1mL待测样本，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度