超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(WST8法)

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(WST8法)

产品介绍：

SOD（EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

测定原理：

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可与WST-8反应产生水溶性染料甲臜，后者在450nm处有吸收；SOD可清除O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液黄色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水

检测原理：

水溶性底物优势：使用水溶性四唑盐WST-8替代传统NBT，具有更高的水溶性和稳定性

酶促反应原理：黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤产生O₂⁻，O₂⁻将WST-8还原为水溶性甲臜染料

活性计算依据：在450nm波长下，甲臜染料的吸光度与O₂⁻浓度正相关，与SOD活性负相关

样本兼容性：适用于细胞培养上清、血清、血浆、组织匀浆等多种样本类型，且不受血红蛋白干扰
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到620nm和510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

直链淀粉标准曲线：将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线

支链淀粉标准曲线：将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线样本测定：取0.1mL待测样本，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度