谷氨酸(Glu)含量测试盒

谷氨酸(Glu)含量测试盒

产品介绍：

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理：

利用专用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在570nm下进行测定。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。

检测原理：

谷氨酸脱氢酶特异性催化：Glu 在谷氨酸脱氢酶作用下，脱氢生成 α‑酮戊二酸，同时将 NAD⁺还原生成 NADH。

340 nm 紫外吸收检测：NADH 在 340 nm 存在特征吸收峰，吸光度上升幅度与谷氨酸含量成正比。

偶联反应排除其他氨基酸干扰：酶对谷氨酸底物高度专一，其他氨基酸几乎不发生反应，特异性强。

标准曲线定量计算：谷氨酸标准溶液同步反应绘制曲线，扣除空白背景后计算样本 Glu 浓度。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。