ssDNA/RNA环化连接酶 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：ssDNA/RNA Circularization Ligase
作用机制：催化单链DNA或RNA分子的自身连接，形成环状DNA或RNA分子；通过识别单链核酸的5'端与3'端，催化磷酸二酯键的形成，实现单链核酸的环化。 

适用样本：单链DNA或RNA分子的环化，适用于RNA沉默、基因调控、环化RNA文库构建等实验。
产品概述
ssDNA/RNA环化连接酶是一类能够催化单链DNA（ssDNA）或单链RNA（ssRNA）分子自身环化的连接酶。它可识别单链核酸分子的5'磷酸基团与3'羟基，并催化两者之间形成磷酸二酯键，使线性的单链核酸分子环化为环状分子。这类连接酶在分子生物学研究中有多种应用，如环状DNA文库构建、环状RNA研究、核酸探针标记、核酸结构与功能研究等。不同来源的ssDNA/RNA环化连接酶可能具有不同的酶学特性，如底物特异性、反应条件、环化效率等。例如，有些连接酶仅对ssDNA有活性，有些则可同时作用于ssDNA与ssRNA；有些需要ATP作为辅助因子，有些则不需要。ssDNA/RNA环化连接酶为单链核酸的环化修饰与功能研究提供了关键的技术工具。
产品特点
热稳定性优异：在60-65℃高温条件下仍能保持高效活性，适合复杂核酸分子的连接反应。

底物兼容性广：可催化单链DNA/RNA分子内环化及分子间连接，对>15nt的单链底物连接效率更高。

不依赖ATP：反应无需ATP提供能量，仅需Mn²+作为辅助因子，降低了反应体系复杂度。

碱基选择性：5'末端连接效率G>A>>>T(U)>>>C，3'末端连接效率T(U)>A>G，3'端为C时几乎无连接产物。

多功能催化：可催化核酸分子与预腺苷化接头连接，ATP过量时还能使核酸分子腺苷化。
操作步骤

一、试剂预处理

取出洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ浓缩液，按试剂瓶标注比例加入无水乙醇，充分混匀后备用

将洗脱液置于65℃水浴锅中预热

二、水样处理与核酸富集

取10mL预处理后的水样（杂质较多的水样需先经0.45μm滤膜过滤）加入50mL洁净烧杯

依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分搅拌混匀

将烧杯置于65℃水浴中孵育15分钟，期间每隔5分钟搅拌一次

三、核酸纯化与洗脱

向烧杯中加入15mL异丙醇，充分搅拌混匀后，将混合液转移至连接富集吸附柱的50mL注射器针筒内

静置2分钟后，开启真空抽滤装置，将液体缓慢抽滤至富集吸附柱内（注意不要抽干）

向针筒内加入5mL洗涤液Ⅰ，静置2分钟后抽滤；再加入5mL洗涤液Ⅱ，静置2分钟后抽滤，重复洗涤液Ⅱ步骤1次

取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常温离心3分钟，去除残留洗涤液

将吸附柱转移至新的收集管，加入50-100μL预热的洗脱液，静置2分钟后12000rpm离心2分钟

收集管中的液体即为纯化后的病毒核酸，可直接用于下游实验或-70℃保存

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注意事项

试剂保存：试剂盒应避光保存于2-8℃，有效期12个月；核酸富集因子避免反复冻融，使用后立即放回冰箱

水样预处理：高浊度或杂质过多的水样，需先经0.45μm滤膜过滤，避免堵塞吸附柱

操作规范：实验全程佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品，避免直接接触水样与试剂；若不慎接触皮肤或眼睛，立即用大量清水冲洗

试剂配制：洗涤液需现用现配，按比例加入无水乙醇后充分混匀，未使用的稀释液可在2-8℃保存1个月

核酸保存：提取的核酸若长期保存，需置于-70℃环境，避免反复冻融；短期可在4℃保存24小时

器材要求：所有实验器材需为无RNA酶耗材，实验前可经180℃干烤6小时或用RNA酶清除剂处理