T4 RNA 连接酶

截短型T4 RNA连接酶2为T4 RNA连接酶2的突变体，能特异性将5’末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3’ OH末端。与野生型与T4 RNA连接酶2相比，截短型T4 RNA连接酶2催化的的连接反应无需ATP，但需预腺苷化接头，这样连接反应的背景程度的降低，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶可用于二代测序small RNA 的文库构建，优化了接头的连接过程。 [T4 RNA连接酶2]

组分

组分名称 数量
T4 RNA Ligase2, truncated K227Q (200 U/μl) 20 μl/100 μl
10×T4 RNA Ligase Buffer 500 μl
50% PEG 8000 500 μl

应用

将预腺苷化的DNA或RNA序列连接到任何RNA的3’末端
将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA文库构建
将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异性cDNA文库构建

活性定义

200单位指在标准反应体系，25℃反应条件下，1h能将80%的31-merRNA连接到预腺苷化的17-merDNA末端所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

1. 1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时不需要ATP。
2. 反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。
3. 该酶的连接接头需要5’-预腺苷化，不能连接磷酸化底物。
4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。
5. 加入终浓度5~10% PEG 8000可提高连接效率。