人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒

仅供科研使用，不得用于临床检验。

                               人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒

人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒

通用名称：人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒

英文名称：Human VEGF ELISA Kit

【包装规格】

48T/96T

【预期用途】

仅供科研使用，不得用于临床检验。

需要但未提供的材料及耗材：

1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和hrp标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

半自动的酶标仪，如thermo mk3，或者国产酶标仪。

【样本要求】

样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

3、血浆：肝素，edta，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

样本保存和稳定性：

样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

试剂准备

1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。

3、底物：底物液a和b，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

操作程序：

1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。

2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。

3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μl，样本孔加待测样本50μl，空白孔不加。

5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μl。

6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。

8、如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

9、将底物a和b按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μl。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

10、所有孔加入终止液50μl，在酶标仪上读取各孔吸光度（od值）。

【检验结果的解释】

检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（od值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（od值），利用方程计算样品的浓度值。

如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。

【检验方法的局限性】

1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。

2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。

3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。

7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

技术提示：

1、混合蛋白溶液时，避免起泡。

2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。

3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。

6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理：

  所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。

【基本信息】

企业名称：上海将来实业股份有限公司

生产地址：上海市杨浦区五角场高新技术产业园区

固定电话：021-60496032 / 60484409

传真号码：021-55660885 

网   址：www.jonln.com

qq号码：2880522968

邮   箱：shjlsw@163.com

公司简介：

江莱生物（中国老牌ELISA试剂盒供应商）
“江莱生物”10年以来一直致力于免疫学技术的积累与沉淀，目前江莱生物实验室占地约3000平米，技术研发团队50余人，配备了全球最先进的分析和检测设备，我们通过自主创新以及与国内外的科研单位合作研发，不断突破新技术，目前我们研发了上千种指标，质量成熟，并长期出口到欧美市场，赢得了众多科研机构的认可。
产品质量：
我们严格选择国内外最顶尖的原材料并反复测试，以确保每个产品的源头都是高品质的，我们承诺：如有产品质量问题，我们免费为用户退换，直到客户满意。
试用装：
目前市场鱼龙混杂，但江莱生物坚持初心，愿做科研行业的一股清流，诚心推出24T免费试用装，让用户对我公司的产品品质和服务有更全面的了解。
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