大鼠血管内皮生长因子(VEGF)elisa试剂盒

                                             大鼠血管内皮生长因子(VEGF)elisa试剂盒
一、核心检测信息

一、实验原理

主要采用双抗体夹心法或竞争法：

双抗体夹心法（主流方法）：

酶标板预包被抗VEGF单克隆抗体，样本中的VEGF与抗体结合。

加入生物素化检测抗体及HRP标记的链霉亲和素，形成免疫复合物。

通过TMB显色反应，450 nm波长下测定吸光度，浓度与吸光度成正比。

竞争法（少数品牌）：

样本VEGF与标记抗原竞争结合抗体，显色后吸光度与浓度负相关。

 关键性能参数

参数  典型范围/值  来源

检测范围  10-2500 pg/mL（因品牌而异）

灵敏度  3.86-12.43 pg/mL（最低检出量）

精密度  板内CV 3.1%-10%，板间CV 2.5%-15%

特异性  与GDNF、TNF-α等无交叉反应

重复性  批内/批间变异系数＜10%/15%

试剂盒组成

核心组分：预包被抗体酶标板、标准品、生物素化检测抗体、HRP标记链霉亲和素、TMB底物、终止液、洗涤缓冲液。

辅助材料：封板膜、样本稀释液、说明书。

四、样本处理与要求

适用样本：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆液。

处理步骤：

血清/血浆：离心分离（1000×g，15-20分钟），避免反复冻融。

组织匀浆：PBS清洗后匀浆，超声破碎或冻融裂解，离心取上清。

细胞培养上清：直接离心去除杂质。

注意事项：

溶血样本不可用（影响HRP活性）。

高浓度样本需稀释（推荐2-5倍）。

五、操作流程（以双抗体夹心法为例）

加样：标准品与样本各50-100 μL至预包被孔中。

孵育：37℃温育1-2小时。

洗涤：PBST洗板5次。

加酶标抗体：HRP标记抗体100 μL，孵育1小时。

显色：TMB底物显色15分钟，终止液终止反应。

测定：450 nm测OD值，绘制标准曲线计算浓度。

注意事项

试剂保存：未开封试剂盒2-8℃保存，标准品-20℃分装。

操作规范：

避免孔板干燥，洗板需彻底（5次以上）。

建议使用复孔（至少双孔）减少误差。

质量控制：设置空白孔、标准曲线孔及内标孔。

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