乳酸乳球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

乳酸乳球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品描述

本试剂盒采用SYBR Green I染料法，专用于快速、高灵敏度检测 乳酸乳球菌（Lactococcus lactis） 的核酸。适用于食品发酵监控、益生菌鉴定及微生物研究等领域。

检测原理

特异性引物：针对乳酸乳球菌保守基因序列（如16S rRNA或ldh基因）设计。

SYBR Green I染料：与双链DNA结合后发出荧光信号，实时监测扩增进程。

定量分析：通过标准曲线计算样品中乳酸乳球菌的拷贝数或浓度。

组分列表

| 组分名称 | 规格（100T） | 储存条件 |

| 2× SYBR Green Master Mix | 1 mL×2 | -20℃避光 |

| L. lactis 引物混合液 | 200 μL | -20℃ |

| 阳性对照（基因组DNA） | 50 μL | -20℃ |

| 无核酸酶水 | 1 mL | 室温 |

实验步骤

1. 样本制备

提取待测样本DNA（推荐柱式法提取）。

2. PCR反应体系（50 μL）

| 组分 | 体积 |

| 2× SYBR Green Mix | 25 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 5 μL |

| 无核酸酶水 | 补至50 μL |

3. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 30 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

| 熔解曲线 | 60-95℃ | 梯度升温 | 1 |

数据分析

阈值设定：使用仪器软件自动分析Ct值。

标准曲线：以阳性对照梯度稀释后建立线性方程（R²≥0.99）。

熔解曲线：确认单一峰以排除非特异性扩增。

性能参数

灵敏度：最低检测限10 copies/μL

特异性：不与相近菌种（如Streptococcus）交叉反应

重复性：CV < 5%

注意事项

避免反复冻融试剂，分装后使用。

操作时穿戴防护装备，防止核酸污染。

熔解曲线异常可能提示引物二聚体或污染。

有效期与储存

有效期：12个月（-20℃避光保存）。

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