小鼠血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒 新品

产品介绍：

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法。预先包被小鼠VEGF捕获抗体的酶标板中，加入样本或标准品后，VEGF与捕获抗体结合。再加入生物素标记的检测抗体，形成免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素结合。加入显色底物TMB后，HRP催化显色，颜色深浅与VEGF浓度正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），绘制标准曲线，计算样本中VEGF浓度。

产品组成

预包被捕获抗体的酶标板（96孔或48孔）

标准品（浓度梯度，如240、120、60、30、15、7.5 pg/mL）

生物素标记的检测抗体

HRP标记的链霉亲和素

样品稀释液

洗涤缓冲液

底物溶液（TMB）

终止液

其他辅助试剂。

检测步骤

标准品稀释：按说明书进行梯度稀释。

加样：设置空白孔、标准孔和样本孔，加入相应液体。

温育：封板后37℃温育，使抗原抗体充分反应。

洗涤：多次洗涤去除未结合物质。

显色与终止：加入底物显色，再加入终止液终止反应。

测定：酶标仪测定OD值，计算样本浓度。

注意事项

样本处理：避免溶血和高血脂样本，及时离心处理。

试剂保存：试剂盒于2-8℃保存，有效期6个月。

操作规范：严格按说明书操作，避免交叉污染。

结果解读：实验结果需结合标准曲线和OD值准确计算。

性能参数

灵敏度：最低检测浓度通常小于1.0 pg/mL。

特异性：不与人VEGF、PLGF等交叉反应。

重复性：板内和板间变异系数均小于10%。

试剂与样本准备阶段：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

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