人胆囊癌细胞+LUC；GBC-SD+LUC 新品

人胆囊癌细胞+LUC；GBC-SD+LUC

商品属性

来源：61岁男性低分化胆囊癌患者组织（王展明等，2000年建立）

细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长，呈多边形、纺锤形或正方形

STR鉴定：已通过STR检测（GBC-SD）

支原体检测：阴性

生物学特性

标志物分泌：CEA、CA19-9

倍增时间：约21.4小时

致瘤性：可在裸鼠中成瘤，且与原发肿瘤相似

荧光特性：通过慢病毒转染携带Luc基因，但随传代次数增加荧光强度可能减弱，建议使用嘌呤霉素维持筛选压力

培养条件

培养基：RPMI 1640（含2mM L-谷氨酰胺）+ 10%胎牛血清

培养环境：37℃、5% CO₂

传代方法：常规胰酶消化，建议传代比例1:2至1:3

实验操作指南

1. 细胞复苏

快速解冻：将冻存管从液氮或-80℃冰箱取出，迅速放入 37℃ 水浴锅中，轻轻摇晃，使冻存液在 1-2 分钟内完全融化（注意不要让水没过管口）。

转移：用 75% 酒精擦拭管口，将细胞悬液转移至含有 5-10 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO）。

离心：1000 rpm (约 150-200g) 离心 3-5 分钟。

重悬：弃去上清液，加入新鲜完全培养基重悬细胞，接种于 T25 培养瓶中。

培养：放入 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养。次日更换培养基，以去除死细胞和残留的 DMSO。

2. 细胞传代 (当细胞融合度达 80%-90% 时)

吸液：吸去旧的培养基。

洗涤：加入适量 PBS 缓冲液轻轻润洗细胞 1 次（去除残留血清，利于胰酶发挥作用）。

消化：加入 0.25% 胰蛋白酶 (Trypsin-EDTA) 约 1-2 mL (以覆盖瓶底为宜)，放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

观察：显微镜下观察，待细胞变圆、间隙变大或开始脱落时，立即进行下一步。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化（血清能抑制胰酶活性）。

吹打：轻轻吹打细胞层，使细胞完全脱落并吹散成单细胞悬液。

离心：1000 rpm 离心 3-5 分钟。

分瓶：弃上清，加入新鲜培养基重悬，按 1:2 或 1:3 的比例接种到新的培养

注意事项

生物安全：需在二级生物安全柜内操作，废液及接触器材需高压灭菌处理

细胞稳定性：建议收到细胞后传代3次以上再冻存备份，并进行荧光筛选
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