人胆囊癌细胞+LUC；GBC-SD+LUC

                                                           人胆囊癌细胞+LUC；GBC-SD+LUC
产品信息：

GBC-SD+LUC是一种人胆囊癌细胞系，通过慢病毒转染携带Luc（荧光素酶）基因，用于科研中的生物发光成像等实验。

细胞特性

来源与形态：该细胞源自61岁男性胆囊癌患者，形态为上皮细胞样，贴壁生长。部分细胞密集培养时可见巨大空泡，属正常特性。

生长与应用：细胞可分泌CEA和CA19-9，倍增时间约21.4小时，可移植裸鼠成瘤。Luc标记使细胞可用于荧光检测，但传代次数增加会导致Luc荧光强度减弱。

培养操作

培养条件：37°C、5% CO、饱和湿度环境，使用含10%-20%胎牛血清（FBS）的基础培养基（如RPMI-1640）。

传代步骤：

细胞密度达80%-90%时，弃培养基，PBS清洗1-2次

加0.25%胰酶-EDTA消化1-2分钟，显微镜观察细胞脱落

加含血清培养基终止消化，吹打成单细胞悬液

按1:2至1:4比例分瓶，补足培养基继续培养25

复苏与冻存：冻存管37°C水浴快速解冻，混匀后离心弃上清，重悬接种于培养瓶；冻存时用90%血清+10%DMSO现配冻存液，程序降温后液氮保存。

注意事项

无菌操作：全程严格无菌，避免污染；定期检测支原体。

荧光筛选：若需维持Luc荧光，可加嘌呤霉素筛选（起始浓度1ug/ml，逐步增至5ug/ml）。

用途限制：仅用于科研，不得用于临床或转让第三方。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

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具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。