病毒RNA提取试剂盒（吸附柱法） 新品

病毒RNA提取试剂盒（吸附柱法）

试剂简介：

核心功能：从临床样本（血清、咽拭子）、环境样本（水体、表面拭子）或培养物中高效提取病毒RNA，兼容包膜病毒（如流感病毒、冠状病毒）和非包膜病毒（如诺如病毒）。

技术原理：

裂解阶段：含离液盐（如异硫氰酸胍）的裂解液破坏病毒衣壳，释放RNA并抑制RNase活性。

结合阶段：在高盐条件下，RNA特异性结合硅胶膜吸附柱。

纯化阶段：通过乙醇洗涤去除蛋白质、多糖等杂质。

洗脱阶段：低盐缓冲液洗脱高纯度RNA。

下游应用：RT-qPCR、宏基因组测序、病毒载量分析等。

2. 操作流程（以200 μL血清为例）

样本预处理

复杂样本（如粪便）：需先离心去除颗粒物，或加入蛋白酶K消化（56℃ 10min）。

液体样本：直接与裂解液按1:1体积混合，涡旋震荡。

结合与洗涤

将裂解液转移至吸附柱，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。

依次用Buffer RW1（去蛋白）、Buffer RW2（去盐）洗涤离心。

RNA洗脱

空柱离心2分钟彻底去除乙醇残留。

加30-50 μL无RNase水，静置1分钟后离心收集RNA。

3. 关键性能参数

指标 参数要求

RNA得率 ≥90%（10^6病毒颗粒样本）

纯度（A260/A280） 1.8-2.1（提示无蛋白/盐污染）

灵敏度 可检测Ct值≤35的低载量样本（≤50 copies/mL）

交叉污染风险 ≤0.1%（通过吸附柱一次性使用避免）

4. 注意事项与优化策略

抑制物处理：

血液样本中血红素或粪便中多糖可能抑制PCR，建议增加DNase I处理或稀释洗脱液。

样本保存：

短期（72h）可4℃保存，长期需-80℃（避免反复冻融＞3次）。

质量控制：

每批次设置：

阴性对照（无核酸水）监控污染。

阳性对照（已知浓度病毒RNA）验证效率。

5. 常见问题解答

Q：与磁珠法相比如何选择？

吸附柱法：成本低、操作简单，适合小通量（1-24样本）。

磁珠法：自动化程度高，适合高通量（96孔板），但需专用设备。

Q：洗脱体积是否影响浓度？

减少洗脱体积（如30 μL）可提高浓度，但可能降低总得率，需平衡需求。

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