谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测定试剂盒/微量法/96S 新品

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)测定试剂盒/微量法/96S

测定意义：

GSH-Px 是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px 不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与 ROS 反应，生成氧化型谷胱甘肽 GSSG ，从而保护生物膜免受 ROS 的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。

测定原理：

GSH-Px 催化有机过氧化物氧化 GSH ，产生 GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化 NADPH 还原GSSG，再生 GSH ，同时 NADPH 氧化生成 NADP+；NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而 NADP+没有；通过测定 340 nm 光吸收减少速率来计算 GSH-Px 活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96 孔板、和蒸馏水。

GSH-Px 测定操作：

1、酶标仪预热 30 min ，调节波长到 340 nm。

2、混合试剂在 25℃或者 37℃（哺乳动物）水浴中预热 30min。

3、混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一 20 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀 。（当天用完）

4、试剂四的稀释：吸取 21.5μL 试剂四，加入 5mL 蒸馏水充分混匀，临用前配制，配制好的试剂当天使用。

5、测定管：依次在 96 孔板中加入 20μL 上清液、160μL 预热的混合试剂、20μL 稀释后的试剂四，迅速混匀后于 340nm 处测定第 30 s 和第 210s 的吸光值，分别记为 A1 和 A2 。△A 测定管= A1-  A2。

注 意：

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。