小鼠Antithrombin Ⅲelisa试剂盒

检测原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被小鼠抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）捕获抗体的微孔板中，依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和洗涤后，通过TMB底物显色。显色强度与样本中AT-Ⅲ浓度呈正相关，使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值）并计算浓度。

样本处理与保存

血清：采集血液后，3000 rpm离心10分钟分离血清，避免溶血或反复冻融。

血浆：建议使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000 rpm离心30分钟取上清。

保存：短期可存于2–8℃，长期需分装后-20℃以下保存，避免反复冻融。

性能参数

灵敏度：检测下限≤10 pg/mL。

准确性：标准品线性回归相关系数R²≥0.990。

特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性：板内、板间变异系数均<15%。

操作步骤

包被：用碳酸盐缓冲液（pH 9.6）稀释捕获抗体至1–10 μg/mL，每孔加100 μL，4℃过夜后洗涤。

加样：加入待测样本或标准品100 μL/孔，37℃孵育1小时，洗涤。

酶标抗体：加入HRP标记检测抗体100 μL/孔，37℃孵育30–60分钟，洗涤。

显色：加入TMB底物100 μL/孔，37℃避光显色10–30分钟，终止后测定OD值。

注意事项

实验需设空白孔、阴性及阳性对照，建议样本做双复孔。

酶标板开封后未用完需密封干燥保存。

避免使用溶血、脂血或细菌污染样本；浑浊样本需离心澄清后检测。

显色时间可根据颜色深浅调整，终止后需立即读数。

储存条件

试剂盒保存于2–8℃，有效期见外包装。

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