小鼠ELISA试剂盒

产品基本信息

1. 产品名：小鼠ELISA试剂盒
   检测原理：双抗体夹心法

   预包被小鼠特异性捕获抗体固相酶标板→样本抗原结合→HRP 酶标检测抗体结合→TMB 底物显色→450nm 测 OD 值，标准曲线换算浓度

2. 适用样本：小鼠血清、血浆、细胞上清、组织匀浆、腹水、尿液

3. 规格：96T（8×12）、48T

4. 保存条件：2～8℃避光，切勿冷冻；有效期见外包装标签

5. 检测波长：主波长450nm，参比波长 630nm

试剂盒组分

1. 预包被酶标板：96 孔

2. 标准品（冻干）：1 支

3. 标准品稀释液：1×20mL

4. 生物素标记检测抗体：1×10mL

5. HRP 亲和素工作液：1×10mL

6. 浓缩洗涤液（20×）：1×20mL

7. TMB 底物 A 液、B 液：各 1×10mL

8. 终止液：1×10mL

9. 封板膜、说明书各 1 份

实验前准备

1. 试剂盒所有试剂提前 30min 平衡至室温，不可直接 37℃孵育

2. 浓缩洗涤液：按1:20用蒸馏水稀释，现配现用

3. 冻干标准品：离心后加稀释液复溶，静置 15min 混匀，倍比梯度稀释

4. 样本处理：血清 / 血浆避免溶血、脂血、黄疸；上清无浑浊杂质；高浓度样本提前稀释

标准品梯度稀释

1. 原倍标准品：100μL

2. 1 号管：标准品 50μL + 稀释液 50μL

3. 依次倍比稀释，共 7 个浓度梯度 + 空白 0 孔，所有标准孔做复孔

标准操作步骤

1. 设孔：空白孔、标准品孔、样本孔，均做复孔

2. 加样：每孔加100μL标准品 / 待测样本，加至孔底、不碰壁、不起泡

3. 孵育：封板→37℃ 90min

4. 洗板：弃液→吸水纸拍干→每孔 350μL 洗涤液→静置 30s→甩干，重复洗板 5 次

5. 加检测抗体：每孔加生物素抗体 100μL→37℃孵育 60min

6. 重复洗板 5 次

7. 加 HRP 亲和素：每孔 100μL→37℃避光孵育 30min

8. 重复洗板 5 次

9. 显色：A 液 + B 液 1:1 混合，每孔加 100μL→37℃避光 15min，溶液变蓝

10. 终止：每孔加终止液 50μL，蓝色立刻变黄

11. 读数：15min 内酶标仪 450nm 测定各孔 OD 值

结果计算

1. 扣除空白孔 OD 值，取复孔平均值

2. 以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，拟合四参数 Logistic 曲线

3. 代入样本 OD 值，算出浓度 × 稀释倍数 = 最终样本含量

注意事项

1. 全程无菌避光，不同试剂盒试剂不可混用

2. 洗板务必彻底，残留液会严重偏高 OD 值

3. 孵育时间、温度严格把控，超时显色过深

4. 溶血、高脂样本严重干扰结果，不可使用

5. 废弃废液、枪头按生物垃圾无害化处理

6. 剩余板条密封 2～8℃保存，尽快用完